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        小鼠胚胎泌尿系统获取实验

        相关实验:小鼠胚胎泌尿系统获取及体外培养实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        器材:

        体式解剖镜、眼科剪、眼科镊、显微镊。

        试剂:

        ① 1 x PBS 缓冲液

        步骤

        小鼠胚胎泌尿系统获取实验的基本过程可分为如下几步:

        A 按标准操作进行配鼠,检栓。

        B 取怀孕所需特定天数雌鼠,断颈处死,取得胚胎放入 PBS 缓冲液中。

        C 小鼠胚胎的泌尿系统从胚胎期 12.5 天(E12.5)开始可以从体内完整分离出来,在 E12.0 前一般选择在体外观察和实验。E17.5 以后的胚胎由于体积较大,取泌尿系统之前最好把胚胎固定。

        D 去掉胚胎头部,打开胚胎的胸腔和腹腔。

        E 泌尿系统处于腹腔背部紧贴小鼠的体腔壁。把靠腹腔腹部的组织器官如消化道、肝脏、脾脏等移除。这时可以看到两个椭圆形豆状的器官,就是肾脏。肾脏通过输尿管连接到胚胎腹腔下部的膀胱。小心地用显微镊把泌尿系统由膀胱开始从体腔壁上分离下来,可以带一些其他的组织,下一步再仔细分离。

        F E13.5 之前,由于泌尿系统较小,这一步可在显微镜下进行操作。

        G 将取得的泌尿系统放入 PBS 缓冲液中,借助体式解剖镜观察。仔细分离掉除泌尿系统以外的其他器官组织,如膀胱输尿管连接处一般会连有直肠,输尿管一般与一些血管并行,肾脏可能会连有肝脏或膈膜的一部分。每个肾脏上靠头部的位置都有一个颜色偏红的小点,是肾上腺。

        H 如果需要对泌尿系统进一步分离,可在体式解剖镜下取得肾脏,输尿管和膀胱。这一步通常针对 E13.5 以后的胚胎。

        I 必要时用胚胎的尾巴或卵黄膜提取 DNA,进行基因鉴定。结果示例如图 8-6-1 所示。小鼠胚胎泌尿系统获取实验

        注意事项

        对于胚胎期输尿管发育异常的研究,在以上分离的基础上,可以通过体外活细胞工作站连续监测其动态改变,分析输尿管的蠕动能力。也可以进一步体外培养,研究在不同因子刺激情况下的信号通路,如潜在下游分子的抑制挽救能力等。

        来源:丁香实验

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