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        支气管长张力测定实验

        相关实验:支气管长张力测定实验

        最新修订时间:

        简介

        对支气管长张力进行测定,可以分析对气管有扩张或收缩功能药物的实际效果。

        材料与仪器

        器材:手术工具、小血管线式肌肉描记仪。

        试剂:

        ① Krebs 生理盐溶液(118.07 mmol/L NaCl,4.69 mmol/L KCl,2.52 mmol/L CaCl2,1.16 mmol/L MgSO4,1.01 mmol/L NaH2PO4,25 mmol/L NaHCO3 和 11.10 mmol/L glucose);

        ② Krebs 生理盐溶液 (63.39 mmol/L NaCl,60 mmol/L KCl,2.52 mmol/L CaCl2,1.16 mmol/L MgSO4,1.01 mmol/L NaH2PO4,25 mmol/L NaHCO3,11.10 mmol/L 葡萄糖);

        ③ 三溴乙醇(avertin)。

        步骤

        支气管长张力测定实验的基本过程可分为如下几步:

        A 取成年小鼠,以 240 mg/kg 的用量腹腔注射三溴乙醇(avertin)进行麻醉。

        B 打开小鼠胸腔,将整个肺连同主气管小心取下来,放入预先准备好的 Krebs 生理盐溶液中。

        C 在体视镜下小心去除围绕在主气管和主支气管周围的其他组织,避免损伤到肌肉。

        D 将分离出来的左侧主支气管(左侧只有一个肺叶),沿着分叉端和入肺端小心剪下,并修剪成 2 mm 的支气管环(保留入肺端,修剪分叉端)。

        E 在 Danish Myo Technology(DMT)公司的小血管线式肌肉描记仪的浴槽中(small-vessel wire myograph chamber)加入 5 ml 预热到 37 ℃ 的 Krebs 生理盐溶液,并将剪下来的支气管环用 0.4 mm 直径的钢

        丝线挂在槽中(注意让线搭在肌肉上,而不是软骨环上)。

        F 将浴槽连接到肌肉描记仪的主机上,通入含有 5% CO2 和 95% O2 的混合气,插入温度传感器,温度设定在 37 ℃,并开始在计算机上用 Chart 软件记录。

        G 气管环在未拉伸的状态下平衡约 10 分钟,然后给予气管基础拉力,通过多次调节,使基础张力平衡在 5 mN 左右,并平衡约 40 分钟。

        H 用 5 ml 含有 60 mmol/L KCl 的 Krebs 液在实验前预刺激气管环,大约收缩 5 分钟后用 Krebs 液洗掉 KCI。

        I 开始实验,可以使用含不同浓度 KCl 的 Krebs 液刺激,测定去极化诱导的气管收缩,也可以用不同的激动剂(如 MCh)按梯度刺激气管,测定其对气管收缩的作用,也可以在激动剂诱导收缩后,分析舒张剂的舒张作用。测定结果如图 8-4-6 所示。支气管长张力测定实验

        来源:丁香实验

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