气管导管相关性细菌生物膜感染动物模型的建立

目前，气管导管相关性生物被膜感染动物模型主要有以下两种：一是将灭菌的导管插入气管后，将一定量菌液通过导管注入肺内；另一种是将带菌的导管经口插入气管，留置导管于气管内。常用的实验动物有家兔、大鼠。

静脉置管法建立静脉置管感染动物模型的造模方法分有无导管两类，具体步骤如下：

（一）菌液通过天菌导管注入肺内

A、挑取铜绿假单胞菌临床分离株单菌落接种于 L-Broth 培养液中，37 ℃、200 r/min 振荡培养过夜。

B、分光光度计测定菌液 OD 值，调整 OD 值至 0.5。

C、取 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g 麻醉大鼠，固定大鼠四肢和头，将颌下至两前腿之间的皮毛剪掉，用碘酒从中间向外周消毒，再用乙醇脱碘。

D、用镊子提起皮肤，用小剪刀剪开一个小口，再在消毒范围的正中，从颌下至胸部剪一个长约 1.5 cm 的小口。用剪刀剪开浅筋膜，直至暴露肌肉，用弯钳从中央钝性分离肌肉直至暴露气管。

E、分离气管周围组织，将小管垫放到气管下，用小剪刀垂直剪开气管一个长约 0.5 cm 的小口，将灭菌导管放入气管内，再用小缝线针穿过气管切口远端最近的软骨间肌肉，并穿过导管，从切口近段最远的软骨间肌肉穿出。先拉紧缝线，观察大鼠呼吸情况，如平稳即可结扎。

F、将菌液通过导管缓慢注入肺内，然后将皮下组织理顺盖好，将皮肤缝合后用乙醇消毒伤口。

G、在不同时间点处死大鼠取出导管研究肺部变化。

（二）长有生物膜的导管留置气管

A、挑取铜绿假单胞菌临床分离株单菌落接种于 L-Broth 培养液中，37 ℃、200 r/min 振荡培养过夜。

B、分光光度计测定菌液 OD 值，调整 OD 值至 0.5。

C、接种菌液于预先放置无菌导管 (约 l cm，作为 BF 生长的载体) 的 24 孔细胞培养板中，每孔 1 mL，隔日换液，7 天后得到成熟 BF。

D、取 10% 水合氯醛 03 mL/100 g 麻醉大鼠。固定大鼠四肢和头，将颌下至两前腿之间的皮毛剪掉，用碘酒从中间向外周消毒，再用乙醇脱碘。

E、用镊子提起皮肤，用小剪刀剪开一个小口，再在消毒范围的正中，从颌下至胸部剪一个长约 1.5 cm 的小口。用剪刀剪开浅筋膜，直至暴露肌肉，用弯钳从中央钝性分离肌肉直至暴露气管。

F、分离气管周围组织，将小管垫放到气管下，用小剪刀垂直剪开气管一个长约 0.5 cm 的小口，将长有 BF 的导管放入气管内，再用小缝线针穿过气管切口远端最近的软骨间肌肉，并穿过导管，从切口近段最远的软骨间肌肉穿出。先拉紧缝线，观察大鼠呼吸情况. 如平稳即可结扎。