坏死性小肠结膜炎动物模型的建立

目前认为早产、缺氧窒息、感染等是 NEC 发病的高危因素。选用新生大鼠，给予根据上述独立危险因索可建立新生儿坏死性小肠结肠炎动物模型。

根据 NEC 发病特点，选用新生 SD 大鼠，使用「人工喂养+缺氧复氧冷刺激+LPS」三因素联合干预的造模方法，更接近 NEC 发病的临床特征。

本研究建立的新的动物模型综合了早产、低出生体重、窒息缺氧、缺血再灌注损伤，快速超量人工喂养、肠道致病菌感染等多种致病危险因素，在病因学上更符合 NEC 的病理生理机制，是研究新生儿坏死性小断结肠炎较为理想的种动物模型。

坏死性小肠结膜炎动物模型建立的步骤如下：

（一）实验动物及处理:

A、新生 SD 大鼠于出生当日与母鼠分离，置于新生鼠保育箱内，进行人工喂养。

B、用清洁无菌 1.9 F 硅胶管每 4 小时经口插管喂养一次，喂养前分别用生理盐水及 75% 医用乙醇清洁新生鼠口腔周围皮肤。

C、喂养完的硅胶管立即清洗消毒后，浸泡于盛放 75% 医用乙醇的密闭用容器中备用，并于下次使用前取出，用灭菌生理盐水彻底清洗。每只硅胶管消毒后仅应用于 1 只新生鼠。

D、首次喂养量为 0.1 mL，以后每 24 小时增加 0.1-0.3 mL。

（二）缺氧复氧冷刺激：

A、（1）测氧仪调零后，将探头连接于密闭缺氧箱顶端缺口处，胶布封闭，入气孔中充入纯氮，控制氮气流量为 15 L/min，箱内氧气浓度降至零后迅速将新生鼠置入，持续通入氮气，10 分钟后打开箱道取出新生鼠。

B、（2）置于 100% 氧气环境中，保持 10 分钟。

C、（3）立即置于 4 ℃ 冰箱中刺激 10 分钟。每日 3 次，处理后送回保育箱或母鼠笼中喂养，连续 3 天。

（三）LPS 灌胃：

A、LPS 以 10 mg/kg 稀释于 0.1 mL 灭菌水中，每日 1 次灌胃，连续 3 天。