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        卵母细胞体外成熟实验

        相关实验:雌性小鼠生殖生物学分析实验

        最新修订时间:

        简介

        卵母细胞体外成熟实验的目的是检测由卵巢中分离得到的处于前期 I 中的卵母细胞,在体外培养的条件下,是否能成熟并进行正常的减数分裂过程。同时也可以在开始培养后不同时间点观测卵母细胞体外成熟的变化。

        材料与仪器

        器材:


        ① 解剖器具


        ② 立体显微镜


        ③ 25 G 注射针头


        ④ 玻璃管


        ⑤ 二氧化碳培养箱


        ⑥ 培养基。


        试剂:

        ① PMSG;

        ② M2 培养基;

        ③ M16 培养基。

        步骤

        卵母细胞体外成熟实验的基本过程可分为如下几步:

        A 向未性成熟的 24 日龄小鼠注射 5 U 的 PMSG。

        B 注射 PMSG 后 48 小时,将小鼠处死。取出卵巢(注射过 PMSG 后的卵巢相对于未注射的要膨大)置于 PBS,在解剖镜下剥去卵巢外的包膜。

        C 转移卵巢至 M2 培养基中,使用 25 G 注射针刺破卵巢表面的卵泡,使其中的卵母细胞释放出来。挑选含有核膜的成熟卵母细胞,使用玻璃管吸出,转移至在二氧化碳培养箱中预热过的 M16 培养基中培养。

        D 培养 1.5 小时后,显微镜下观察卵母细胞,正常情况下大部分卵母细胞将发生核膜破裂,细胞核消失。剔除没有发生核膜破裂的卵母细胞,其余发生核膜破裂的卵母细胞继续培养。

        E 核膜破裂后 6 小时卵母细胞会到达减数分裂中期 I;核膜破裂 12~14 小时后卵母细胞会排出第一极体,停滞在减数裂中期 II。

        F 根据实验需要选取时间点对体外培养的卵细胞进行固定和染色,观察染色体、微管等形态来判断减数分裂过程是否正常。

        来源:丁香实验

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