小鼠体内自然杀伤细胞清除

NK 细胞过继回输一般经静脉注射；体内清除则可通过腹腔注射针对 NK 细胞的抗体，如 PK136 单抗、抗 asialo GM1 抗体和抗 Ly49 抗体等，清除 NK 细胞。各种抗体的特异性不同，主要有以下特点：

①PK136 单抗（抗 NK1.1 抗体），特异性清除 NK1.1＊细胞。PK136 单克隆抗体（IgG2a）特异性识别小鼠 NK1.1＋细胞，在小鼠补体存在时，该抗体结合的 NK 细胞能被特异性清除。NK1.1 表达具有种系特异性，仅表达于 C57BL／6、C57BL／10 或 H2b、H2d 和 H2q 同系小鼠，而 BALB／c、AKR、CBA、SJL 及 C3 H 等小鼠不表达 NK1.1。由于 NKT 细胞也表达 NK1.1，因此，应用 PK136 单抗清除 NK 细胞时，同样能够清除 NKT 细胞。

②抗 asialo GM1 抗体，该抗体识别表达在 NK 细胞表面的糖脂唾液酸神经节苷脂 asialo GM1。抗 asialo GM1 抗体能够有效清除小鼠及大鼠体内的 NK 细胞，但大剂量的抗 asialo GM1 抗体也能与小鼠的单核细胞、胚胎胸腺细胞及部分 T 细胞相互作用。因此，在高浓度应用该抗体时，可以删除部分的单核细胞和 T 细胞。

③抗 Ly49 抗体，Ly49 是表达于成熟 NK 细胞上的受体，是成熟 NK 细胞的标志，但 NKT 细胞同样表达 Ly49，因此，应用抗 Ly49 抗体只能清除成熟的 NK 细胞及 Ly49＋NKT 细胞。

自然杀伤细胞清除的基本原理是通过腹腔注射针对 NK 细胞的抗体，如 PK136 单抗、抗 asialo GM1 抗体和抗 Ly49 抗体等，清除 NK 细胞。

小鼠体内自然杀伤细胞清除的基本过程可分为以下几步：

（1）用 1 mL 注射器吸取 PK136 单抗（200～500 μg／只）、或抗 asialo GM1 抗体（200 μg／只）或抗 Ly49 抗体（10 μg／只），腹腔注射至小鼠体内。同时设立对照组。

（2）分别在注射 1、2 及 3 天后取小鼠外周血 1～2 滴，制备外周血单个核细胞悬液。

（3）以荧光标记的 DX5 单抗或 NK1.1 抗体染色，流式细胞仪检测小鼠体内 NK 细胞清除效果。一般起效时间为 1～3 天。

（1）每一批次的抗体效价可能存在差异，应通过预实验确定抗体有效剂量。

（2）使用的抗体应注意无菌，以避免实验动物的感染。