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        细胞中碱性蛋白显示实验

        相关实验:细胞中碱性蛋白显示实验

        最新修订时间:

        简介

        不同的氨基酸带有不同化学性质的侧链基团,有的带有碱性侧链,有的带有酸性侧链,这使由氨基酸组成的不同蛋白质拥有不同数目的碱性基团和酸性基团,这些基团会使蛋白质在不同的 pH 溶液中带有不同的净电荷。如在生理条件下,整个蛋白质分子所带负电荷多,则为酸性蛋白质;带正电荷多,则为碱性蛋白质。

        因此,可将标本用酸处理提取出核酸后,用带负电荷的碱性染液固绿(pH8.2~8.5)染色,使在此 pH 环境中带正电荷的碱性蛋白被显示出来。

        原理

        细胞中碱性蛋白显示实验的基本原理是细胞中含量最为丰富的碱性蛋白是组蛋白,组蛋白与 DNA 紧密包裹形成的复合物称为染色质,它作为遗传信息的储存载体存在于真核细胞的细胞核中。组蛋白合成于细胞周期 S 期的细胞质中,合成后迅速由核孔转运进入核中完成与 DNA 的组装,因此,细胞中显示的碱性蛋白较多存在于细胞核中。

        材料与仪器

        器材:


        解剖器材、蜡盘、染色缸、载玻片、盖片、吸管、吸水滤纸、普通光学显微镜、恒温水浴箱、蟾蜍。


        试剂:

        ①5%三氯乙酸;

        ②0.1%碱性固绿;

        ③70%乙醇。

        步骤

        细胞中碱性蛋白显示实验的基本过程可分为如下几步:

        A.取1 只 蟾蜍,以捣毁脊髓法处死,将其腹面朝上固定于蜡盘上,剪开胸腔,打开心包。将心脏剪一小口,取心脏血1 滴 滴于载玻片一端,推片,室温晾干。

        B.将涂片浸入70%乙醇中固定5 min ,室温晾干

        C.浸入5%三氯乙酸中,60 ℃ 水浴30 min 。

        D.流水充分冲洗,去除三氯乙酸,滤纸吸去残留水分。

        E.浸入0.1%碱性固绿中染色15 min 。

        F.流水冲洗,室温晾干。

        G.镜检或滴1 滴 中性树胶,加盖盖片进行封片观察。

        注意事项

        1.三氯乙酸作用后的载片一定用流水充分、彻底冲洗,以免干扰固绿的染色。

        来源:丁香实验

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