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        基本方案

        相关实验:酵母提取物的制备实验

        最新修订时间:

        原理

        酵母细胞的裂解方法有很多种,包括自溶、压力破碎(如French加压罐)、研磨(玻璃珠振荡)和酶裂解(如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨,是最简便的方法之一。这对于小体积(如<1mL的)和数升体积都很有效。经相差显微镜检测,细胞破碎率一般>95%。

        材料与仪器

        步骤

        ①在微型离心机上离心3mm,以收集细胞。


        ②去上清,用PBS重悬细胞,再离心3min。


        ③去上清,估算细胞沉淀的体积,向细胞沉淀中加人3倍体积的冰浴裂解缓冲


        液,悬浮后置于冰上。


        ④加入等体积的预冷玻璃珠。


        ⑤剧烈振荡悬浮液30s。


        ⑥重复步骤⑤,并在相差显微镜下观察,直到大部分酵母细胞被裂解。


        ⑦4℃条件下在小型离心机中离心悬浮液5min,


        ⑧小心地倒出上清,并转移到另一管中,置于冰上备用。

        注意事项

        器材预处理:将玻璃珠在1mol/L的HCl中洗两遍,然后在裂解缓冲液中洗两遍。将洗过的玻璃珠液泡于4℃条件下储存在少量的裂解缓冲液中。

        来源:丁香实验

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