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        氧化反应测定

        相关实验:乙醇脱氢酶的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        乙醇 + NAD+ ⇌ 乙醛 + NADPH + H+

        由于平衡易向正方向移动,逆反应的抑制必须加入碱性的 pH 试剂以及另一种试剂来捕捉乙醛,以便将产物从平衡中移走。


        材料与仪器

        步骤

        实验所需「试剂」具体见「其他」


        0.98 ml 实验混合物
        氧化反应测定


        0.02 ml ADH 稀释溶液


        25℃ 时,于 340nm 处吸收值降低。NADH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

        常见问题

        试剂:


        75 mmol/L 甘氨酸-二磷酸钠溶液 pH 9.0(10 g Na4P2O7· 10 H2O+0.5 g 甘氨酸溶于 300 ml H2O,用 1 mol/L HCl 调节至 pH 9.0)


        0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.5


        乙醇,p.A.(Mr=46.1,d=0.81 g/ml)


        0.1 mol/L NAD(0.633 g 溶于 10 ml 0.1mol/L 磷酸钾,pH 7.5)


        0.1mol/L 1,4-二硫代赤藻糖醇(DTE,Mr=154.3,154 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.5)


        0.1 g BSA 溶于 100 ml 0.1 mol/L磷酸钾,pH 7.5(BSA 溶液)


        2.2 mol/L 氨基脲(Mr=11.5,2.5 g 氨基脲-HCl 溶于 10 ml 2mol/LNaOH,用 5mol/L NaOH 调节 pH 到 6.3~6.5)


        ADH,稀释同前

        来源:丁香实验

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