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        载网的准备与支持膜的制备

        相关实验:病毒透射电镜载网与支持膜的选择

        最新修订时间:

        原理

        因为电子的能量很弱,电子束不能透过玻璃,故用于透射电镜观察的标本不能置于载玻片上,尤论是病毒的悬滴标本或者病毒细胞培养物的超薄切片标本都要置于一层极薄的支持膜上。支持膜的厚度一般以 10~15nm 为宜。支持膜附在一个用铜或铢制成的载网上,载网的直径为 3mm 。

        材料与仪器

        步骤

        1. 载网的准备 载网大多数用铜片经特殊的方法腐蚀而成,故又称铜网。因其网孔的多少可以分为: 400 目、 200 目、 100 目、 50 目或单孔铜网。铜网可在专业用品商店购到。如果用于细胞化学或免疫细胞化学的标本,则最好用锦网,因为铜网会产生化学反应而影响结果。载网在使用前必须经过严格的洗涤,以除去载网上的污物,方可使用。


        2. 支持膜的制备 附着于载网上的薄膜称支持膜。支持膜的作用在于支撑标本使之有所依附而得到稳固。这层支持膜很薄,电子容易透过,有足够的机械强度,耐电子束轰击,本身无任何结构且对生物标本具有化学稳定性。支持膜中最常用的为有机材料薄膜,尤以用聚乙烯醇缩甲醛(Formvar) 和火棉胶为最。将其溶于易挥发的有机溶剂中即可。


        近年来,国内外很多实验室在用铜网捞取承载超薄切片时,已不再在铜网上铺一层支持膜,而是用无支持膜的铜网直接捞取切片,不用支持膜的铜网也可牢固的吸附超薄切片,且在电镜下细胞结构更加清晰。不需支持膜的铜网只要用无水乙醇或丙酮浸泡之后待干即可用来贴附超薄切片。

        来源:丁香实验

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