从小鼠腹股沟脂肪垫获取ASCs

人和小鼠的脂肪组织均可用于分离ASC，可以获得相当数目的ASCs。人脂肪组织通常来源于抽脂。小鼠脂肪组织则取自腹股沟处脂肪垫。

(a)37℃水浴中预热HBSS和ASC培养基。

(b)麻醉动物后处死。

(c)转移动物至层流净化罩中。

(d)70%酒精消毒腹部。

(e)采用低位横向切口打开腹腔。

(f)用镊子取出性腺/附睾和腹股沟处的脂肪垫。

(g)将脂肪置于培养皿中，加入HBSS。

(h)待所有动物脂肪取出后，将脂肪转移至新的培养皿中。

(i)加人含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的HBSS 2〜3 min。

(j)漂洗组织并用HBSS洗涤脂肪。

(k)用无菌镊子将脂肪转移至50 ml离心管中。

(l)用无菌剪刀将脂肪切碎。

(m)加入与组织体积相同的胶原酶溶液并混匀。

(n)将离心管置于37℃水浴中60 min,其间不时混匀一下。

(o)离心，50〜100 g，5 min。

(p)取出离心管，用力摇晃（将基质细胞与原代脂肪细胞完全分离），再次离心5 min。.

(q)小心吸去上层油脂，油脂层中含有原代脂肪细胞，注意不要破坏位于下方的基质-血管细胞层。

(r)加人5〜10 ml PBSA,重悬沉淀，再次离心5 min。

(s)洗涤三次，注意不要吸走基质-血管细胞层。

(t)最后一次洗涤后，加人8 ml ASC培养基重悬沉淀，转移至T25培养瓶中，置于37℃,5% CO₂温箱中。

(u)待细胞贴壁生长2〜4天后换液。

(v)换液时通过弃去培养基，从而去除未贴壁的细胞。

(w)以后每周更换培养基2次。