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        体内/外DPSCs的成牙和成骨分化

        相关实验:未分化的牙髓干细胞 DPSCs 和乳牙干细胞SHEDDE鉴定

        最新修订时间:

        原理

        STRO-I是MSC的早期细胞标志分子之一,可用于鉴定DPSCs和SHED的未分化状态。STR0-1的单克隆抗体首先是作为能与人骨髓CFU-F细胞表面高表达的分子作用的试剂被大家所认识的。DPSC和SHED中含有大约10%20%的STRO-I阳性细胞。非常值得注意的一点,体外扩增后的DPSCs和SHED是不均一的群体,随着连续传代会逐渐的丢失它们的干性(STR0-1和3G5的表达丢失)。体外,在含有地塞米松、无机磷酸盐和L-抗坏血酸的培养基中,DPSCs和SHED能分化为成牙本质细胞和成骨细胞。

        材料与仪器

        步骤

        体外:

        (a)用常规MSC培养基培养细胞,直到细胞达到完全汇合。


        (b)更换为成牙分化培养基,每周换2〜3次培养基,持续培养6周。(汇合后,细胞可能容易从培养容器的表面脱离。因此,换培养基时要非常小心,避免细胞脱落。)


        体内DPSCs的成牙和成骨分化:

        (a)用MSC培养基培养,直到细胞到达90%汇合。


        (b)用PBSA洗培养皿,洗3次。


        (c)加足够体积的胰蛋白酶-EDTA溶液,37℃孵育。


        (d)确定80%的细胞已从培养容器表面脱离,然后加MSC培养基。


        (e)500g离心6min。


        (f)倒掉上清,用MSC培养基重悬细胞。


        (g)细胞计数。


        (h)将重悬于MSC培养基的(2〜4)×106个细胞和载体混合,置于1.8mL冻存管中。


        (i)37℃旋转孵育1h。


        (j)无菌条件下,将混合物移植到免疫力低下的小鼠皮下。我们通常使用NIH的bg-nu/nu-xid小鼠进行移植。


        (k)在合适的时间点,收集移植物,组织学检测。(在HA/TCP载体和bg-nu/nu-xid小鼠体系中,8周的时间足够DPSCs和SHED形成充分的矿化基质。收集的时间点主要决定于体系。)

        来源:丁香实验

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