• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        基本方案

        相关实验:蛋白激酶C异构体分析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:

        4 μl 5 × PKC 反应缓冲液

        1 μl 10 mg/ml 组蛋白 H1

        1 [γ-32P] ATP 溶液(ATP 终浓度为 5 mmol/L,放射活性为 5 μCi/μl)

        0~14 μl 水

        盖好离心管,放入 30℃ 水浴温育 10 min。

        三个反应为一组设立无底物和酶的对照。每个反应的容积为 20 μl。在步骤 2 中加入水的量取决于所用酶样品的多少。


        2. 加入 1~14 μl 有 PKC 活性的酶样品到预热的反应混合液中,开始反应。


        3. 30℃, 温育 10 min。


        4. 按不同的分析方法加入适当的试剂停止反应:加入 20 μl 10 % 预冷的 TCA 进行 TCA沉淀,10 μl 或 20 μl 预冷的 2 × SDS - PAGE 样品缓冲液进行电泳分析。可用 10 μl 的反应产物点膜,使样品吸附在 P81 磷酸纤维素膜上。用那些方法中的一种继续进行分析。

        常见问题

        有 PKC 活性的酶样品(见辅助方案 1)

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序