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        姆萨 (Giemsa) 染色

        相关实验:放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定实验

        最新修订时间:

        原理




        材料与仪器

        步骤

        1) 将显影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盘中。


        2) 在染色盘中,准备以下各组液体:


        1个盘:用pH 6.8 10 mmol/L磷酸钠缓冲液配制的25倍稀释的吉姆萨染液;


        3个盘:水。


        脱水系列溶液(可重复使用):


        3个盘:分别盛50%、70%和95%乙醇;2个盘:盛有100%乙醇;


        3个盘:盛有二甲苯。


        3) 在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s (依染色时间决定染色的强弱)。将玻片在水中浸泡3次,每次2 min。


        4) 用乙醇系列溶液脱水,每盘中浸泡2 mm,将玻片移至二甲苯盘中,每次浸泡2 min,共 3 次。应注意进行脱水和在二甲苯中平衡的操作,因Permoimt不与水或乙醇相溶。


        5) 在通风橱中,按如下操作压片固定:用一平头镊(拿在左手),从二甲苯中取出一块玻片,夹住磨面端置水平。加4滴Permmmt于另一端(切片所处位置),右手拿一干净的盖玻片,很缓慢地放在载玻片上。在加压片固定介质和盖玻片前,勿使玻片变干,因微小气泡会造成入为假象。


        如用Gelvatol,对切片无需进行脱水处理。例如,在免疫组化试验中。以Gelvatol进行压片固定 按如下进行:滴1小滴Gelvatol于盖玻片上,小心将载玻片贴于液滴上,防止产生气泡。避免施压,否则可能压坏样本,室温下放2〜4 h使之凝固。


        6) 用3 MM滤纸,沿盖玻片边缘,小心吸去多余封片介质/二甲苯,并擦拭载玻片背面(勿擦拭盖玻片)。勿将玻片直立存放于玻片中,因此时封片介质尚未凝固。


        7) 将玻片平放于一硬纸盘上,置42℃温孵箱2天使之凝固。


        8) 以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳、染料和封片介质。用镜头纸或普通棉纸 擦去尘埃。放入玻片盒,必要时,在载玻片上再注明标签。


        9) 显微镜观察玻片,观察时可依信号强弱调节光亮。

        来源:丁香实验

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