备择方案 重组染色质装配反应中的核心组蛋白与 DNA 比率的滴定

1. 按照基本方案 6 步骤 1～6 操作。

要得到真实浓度的近似值，DNA 的浓度由 A260 值计算得到，组蛋白的浓度通过 BCA 分析系统来确定。

2. 按如下所述进行 5 个装配反应：

2.1 在 56.6 ul NH 中（见基本方案 6 步骤 3）加入 1 ul ACF（2～10 U）。

2.2 从冰上取下管子，平衡到室温。

2.3 加入 10.5 ul AM 主混合液（见基本方案步骤 4），及 2.5、2.22、2.0、1.82、 1.67 ul DNA 模板（使用过量的拓扑异构酶Ⅰ变松弛或超螺旋的；见基本方案步骤 5）。马上轻轻地涡旋混匀 2～3 S。

2.4 27℃ 装配 1.5～2.5 h。

3. 按照基本方案步骤 8～12 操作。

4. 从凝胶上分析确定组蛋白与 DNA 最高量的比值，这时仍然能观察到未弥散的梯度。使用下一个最低的比值作为进行进一步装配反应的最理想的比值。重新计算核心组蛋白的有效浓度以使新的最佳比值为 1.0：1。