• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        用逐步盐透析的方法组装核小体模板实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 准备如下的重组混合液:

        约 8 ug 未标记的超声破碎的牛胸腺 DNA (作为载体 DNA; 加自 1~2 mg/ml 储液)

        200 000~400 000 cpm 单独标记的 DNA

        6.4 ug (组蛋白:DNA 为 0.8:1) 或 0.8 ug(组蛋白:DNA 为 1:1) 纯化的天然核心组蛋白(H2A/H2B 和 H3/H4)

        160 ul 5 mol/L NaCl (终浓度 2.0 mol/L)

        TE 缓冲液,pH 8.0,至 400 ul。


        2. 室温 30 min。


        3. 将重组混合液加入 6000~8000 MWCO 透析袋中。


        4. 在 1 L 含有 1~2 mol/L NaCl 的 TE 缓冲液,pH 8.0 中透析重组混合物,4℃ 透析 2 h。


        5. 重组混合液连续在以下新鲜配置的透析缓冲液中进行透析,每次 4℃ 透析 2 h:

        TE 缓冲液,pH 8.0, 含有 1.0 mol/L NaCl

        TE 缓冲液,pH 8.0,含有 0.8 mol/L NaCl

        TE 缓冲液,pH 8.0,含有 0.6 mol/L NaCl


        6. 在不含 NaCl 的 TE 缓冲液,pH 8.0 中透析重组混合物,4℃ 过夜。


        7. 电泳检测核小体的完整性。


        8. 在 10%~30% 甘油梯度上从裸露的 DNA 上纯化组装好的核小体核心,100 000 g 离心 18.5 h。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序