点赞

收藏

分享

基本方案2 基因组 DNA 的扩增

相关实验：患病个体的序列扩增实验

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

试剂、试剂盒	DNA 分子大小标准参照物寡聚核苷酸引物 10 X PCR 扩增缓冲液 4dNTP 混合物 Taq DNA 聚合酶筛（子）琼脂糖矿物油
仪器、耗材	聚丙稀微量离心管循环变温加热器

步骤

1.稀释每个D N A 样本到用于分析的lOOng/W ，并 95°C 加热变性5min，于 4°C 储存。 2•对于每个样本而言，在〇.5m l 微量管中建立如下的50/J 的反应体系： 8jul I.25mmol/L 4dNTP 混合物； I O X P C R 扩增缓冲液；上下引物各250ng; 200ng D N A 基因（从第1 步中的样本加斗1); 50pl无菌水。再加入1.25U Tag D N A 聚合酶。混合，离心，如果是适合加热周期模式，表面加上矿物油。散在控制反应（除了 D N A 的缺失要识别反应）和同步进程。 . 3.取出P C R 使用如下的扩增循环： 30个循环： 30s 94°C (变性） Imin 55°C (退火） Imin 72°C (延伸）最终步骤：无定期 4。。（保存） 4.从每一个第二轮反应中，在用E B 染色的琼脂糖凝胶上（附录3 G ) 电泳IOjuU 包括二条含有已知数量的分子大小标准。

来源：丁香实验

ad image

ad image

相关产品推荐

Es Taq DNA Polymerase，EnzymoPure™, 500 U，阿拉丁

￥222.90

dNTP混合物1 x 20 µ mol-【干冰】dNTP Mix 1 x 20 µmoles

￥22

人基因组DNA，阿拉丁

￥279.90

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5X）

￥139

D15000分子量标准（D15000 DNA Marker）

￥90

相关方法

基本方案1 从淋巴细胞中扩增 RNA

2024-05-13

推荐阅读

酵母基因组DNA简易高效提取方案

基因组DNA文库构建的基本流程

基因组DNA文库构建的基本流程

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

丁香实验小程序二维码

实验小助手

丁香实验公众号二维码

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序