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        无胸腺裸鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        5 只 7〜8 周龄雌性无胸腺(nu/mi) 裸鼠

        PristaneCSigma T-7640)

        Tuberculin 注射器(Iml)

        无菌针头(2 5 号)

        无菌针头(2 1 号)

        杂交瘤细胞,5 X106 个细胞/只小鼠

        0.4 % 的台酚蓝染液(Sigma T 8154)

        无菌尖底离心管(15m l 或 50 ml)

        无 菌 D-PBS

        二、设备

        血球计数板

        光学相差显微镜

        台式离心机

        三、时间要求

        Pristane 预刺激 5 只小鼠约需10min。 完成两次 Pristane 注射,第一次预刺激应在注射 杂 交 瘤 细 胞 前 12d 完 成 。杂 交 瘤 细 胞 需 提 前 培 养 :注射用细胞 的 准 备 大 约 需 要 用30 min,细胞注射大约需要用 10min。

        四、步骤

        1.计划注射杂交瘤细 胞 前 12d,用 2 5 号针给每只小鼠注射0.5 ml Pristane 进行预刺激。腹腔注射过程与 BALB/c 小鼠的操作相似。 Pristane 更易顺着裸鼠无毛光滑皮肤上的针孔回流:简单地握住针头使针筒内无压力并将针头轻轻退出,这样操作对避免出现上述情况是必要的。

        2.注射细胞前两天重复 Pristane预刺激步骤,Pristane 0. 2m l/只。

        3.应提前培养,计数杂交瘤细胞,为注射作准备,方 法 同 BALB/c 小鼠腹水的制备。

        4.用 带 有 2 1 号针头的无菌注射器均匀吸取备好的细胞悬液后向小鼠腹腔注射0.5 ml,注射的部位和方式与 Pristane预刺激的操作相同 [见步骤(1)]。

        5.观察注射杂交瘤细胞后的小鼠 24 h 并且至少要在其后隔天观察其一般状况和腹水产生情况。

        来源:丁香实验

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