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        通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性

        相关实验:对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 在一个培养皿里堆一些潮湿的滤纸片,放一块盖玻片到上面。加 50 μl 含运动蛋白的溶液到盖玻片的表面并涂开。盖上盖子在室温放 5~10 分钟,使蛋白黏附在玻璃上。

        2. 转移盖玻片,用室温的含 2 mmol/L ATP 前的 PME 缓冲液冲洗,并用 valap 封住前后。

        3. 在盖玻片和载玻片之间灌 50 μl 紫杉醇稳定的微管溶液(0.5 mg/ml ),微管可以是通过盐抽提紫杉醇稳定的微管或通过紫杉醇诱导组装磷酸纤维素纯化的微管蛋白二聚体而制备的。让它在放潮湿滤纸的培养皿里呆 5 分钟,然后用新的 50 μl 溶液再灌一次。

        4. 用 50 μl 含 2 mmol/L ATP 的 PME 缓冲液洗涤灌了溶液的部分,洗 4~5 次。

        5. 放到图像增强了的微分干涉相差显微镜上观察。

        来源:丁香实验

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