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        用活化剂裂解方法从悬浮培养的HeLa细胞中制备细胞核

        相关实验:活化剂裂解方法制备细胞核实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 转瓶培养 4 升 HeLa 细胞,便细胞浓度达到 1.0x106 细胞/ml。

        2. 细胞在 1 L 的塑料离心瓶中,用 Sorvall 的 RC-3B 离心机,H-600A 转头,3000 r/min 离心 5 分钟。

        3. 在 30 ml 的 Corex 管中,用 10 ml 冰预冷的 PBS 清洗各细胞沉淀。

        4. 细胞沉淀用 10 ml TM-2 缓冲液重悬浮,室温孵育 1 分钟。

        TM-2 缓冲液:

        0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

        0.002 mol/L MgCl2

        0.0005 mol/L PMSF(临用前添加)

        5. 将装有 TM-2 悬浮液的试管放到一个含冰水的烧杯中冰浴 5 分钟。

        6. 加入 Tritron X-100 至终浓度为 0.5%,再冰浴 5 分钟。

        7. 3 次通过 22 号针头剪切细胞。

        8. 取 5 μl 加到一 22 mm2 的玻璃盖玻片上,在相差显微镜下检查细胞核。

        9. 用 Sorvall 的 RC-5B 离心机,SS-34 转头在 4℃,800 r/min 离心 10 分钟,将细胞核从胞质中分离出来。

        10. 用 10 ml TM-2 缓冲液清洗两遍细胞核。

        来源:丁香实验

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