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        用制备性的自由流动电泳对高尔基体进行亚分部

        相关实验:高尔基体的鉴定实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        1. 从 1.2 mol/L 蔗糖/匀浆液界面处分离富含高尔基体的部分至终体积为 5 ml 左右 。

        2. 分别加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和来自大麦芽的 3-A型 α-淀粉酶。

        3. 将混合物在 4℃ 保温 45 分钟。

        4. 保温结束后用尖端内径约 1 mm 的巴斯德吸管将悬液反复吹吸 40 次完成解除堆积的过程 。

        5. 准备电泳介质(Chamber 缓冲液)

        Chamber 缓冲液:

        10 mmol/L 二乙醇胺

        10 mmol/L 冰酸酸

        5 mmol/L 葡萄糖

        0.25 mmol/L 蔗糖

        0.5 mmoI/L MgCl2

        6. 电泳中采用如下条件(除非厂家另有推荐):167 mA ( 恒流),131±10% V/cm,缓冲液流速为 2.75 ml 每分部每小时,样品注入速度为 3.5 ml/小时,温度为 6℃,采用连续自由流动电泳装置(如 VAP 21,Weber GmbH, Munich, Germany )。

        7. 离心收集得到的分部,例如在微量离心机中离心 2 分钟,然后重悬并用于分析。

        来源:丁香实验

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