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        多核糖体的纯化

        相关实验:细菌细胞的制备实验实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一、真细菌多核糖体

        1. 含有多核糖体(每管 0.6 ml ) 的上清铺到 15%~30% 蔗糖梯度的上面,在该蔗糖梯度的下面为 0.5 ml 的 60% 蔗糖铺垫液,内含如下缓冲液:

        多核糖体蔗糖梯度缓冲液:

        20 mmol/L Tris-HCl,pH 7.6

        5 mmol/L MgCl2

        150 mmol/L NH4CI

        2. 用 Berkman SW 50.1 转头,以 245000 g 离心 130 分钟来沉淀多核糖体。

        3. 倒掉上清并用 5 ml 冷的蔗糖梯度缓冲液漂洗以除去残余的蔗糖,将多核糖体重悬于 400 μl 相同的缓冲液中。将多核糖体贮存于 -80℃。

        二、植物多核糖体

        1. 将重悬的多核糖体铺在 15%~30% 的蔗糖梯度之上,梯度的底层为 0.5 ml 60% 的蔗糖铺垫液。用如下的缓冲液制备蔗糖梯度:

        蔗糖梯度缓冲液:

        20 mmol/L Tris-HCl,pH 7.5

        5 mmol/L MgCl2

        0.2 mol/L KCl

        2. 用 Beckman SW 50.1 转头,以 150000 g 离心 2 小时将多核糖体沉降下来。

        3. 倒掉上清并用 5 ml 冷的蔗糖梯度缓冲液漂洗以除去残余的蔗糖,并将多核糖体重悬于相同的缓冲液中。将多核糖体贮存于 -80℃。

        来源:丁香实验

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