分级分离桥粒

1. 在最终的桥粒沉淀中加 20 ml 尿素溶液，用玻璃/Teflon 匀浆器匀浆，用尿素溶液稀释匀浆物使蛋白质浓度为 0.15 mg/ml，用 1 mol/L 的 Tris-HCl 调节溶液的 pH 值到 9.0 在室温至少搅拌 1 小时。

尿素溶液：

10 mmol/L Tris-HCl ( pH 9.0)

9 mol/L 尿素

0.2% β-巯基乙醇

5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽

5 μg/ml 抑胃酶肽    

1 mmol/L PMSF

2. 100000 g 20℃ 超离心 60 分钟。