• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)

        相关实验:黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)

        最新修订时间:

        原理

        应用此种扩增方法,文库不容易失真,这是由于在任何一步骤中,含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长,而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法,即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 培养基

        含 25 μg/ml 卡那霉素 TB 琼脂平板(150 mm)

        TB 培养基

        2. 专用设备

        无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜(137 mm)。

        3. 载体和菌株

        λ 噬菌体包装反应

        适宜的大肠杆菌接种菌株(如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)

        二、方法

        预培养

        1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化的菌落的包装反应体积。

        2. 取若干无菌试管,向每管中加入 0.2 ml 接种细菌,接着加入包装反应液并使其达到步骤 1 确定的体积。

        3. 将试管在 37℃ 温育 20 min。

        4. 各管中分别加入 0.5 ml TB, 继续温育 45 min。

        在滤膜上扩增

        5. 将标上编号的无菌滤膜铺在数个含 25 μg/ml 卡那霉素的 150 mm TB 琼脂平板上(滤膜数量与步骤 2 中试管数相同)。

        6. 用无菌涂布棒将每支试管内容物涂在琼脂平板上的滤膜表面。待接种物被滤膜吸收后,将平板移至 37℃ 温箱放置数小时至过夜(12~15 h)。

        7. 制作每个主滤膜的影印滤膜,-70℃ 保存。

        8. 筛选文库时,融化影印滤膜,裂解滤膜上的克隆,然后进行与标记探针的杂交。

        黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
        黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序