从组织分离粗制质膜组分的另一实验方法

设备

Dounce 氏玻璃匀浆器（15-ml)，带 A 杵

试剂

匀浆缓冲液

(配方，见 试剂的配制 PP.234-240)

操作程序

全部操作在 0~4℃ 下进行。

1) 在冰冷的匀浆缓冲液屮切碎组织块，倾出血水。用匀浆缓冲液漂洗组织碎块, 并将它们置于冰上。重复上述操作，直至组织碎成 1mm³ 大小的碎块，且无可见的血。

2）加入 5 倍（v/v) 于组织块体积的缓冲液，在置于冰浴的 Dounce 氏玻璃匀浆器中用 A 杵抽研 10~20 次，匀浆组织。

3) 匀浆 4℃ 下 600 g 离心 10 min。上清含细胞膜、线粒体和细胞溶胶，沉淀中有未破碎的细胞及细胞核。弃沉淀。

4) 上清下 8000 g 离心 10 min, 沉淀线粒体。弃沉淀。

5) 上清用角转头离心，4℃,100000 g 离心 20 min。弃上清。

6) 用匀浆缓冲液重悬沉淀。在小号 Dounce 氏匀浆器中匀浆，再次 4℃、100000g 离心 20 min。弃上清。

7）用小体积的适宜缓冲液重新彻底匀浆沉淀。

8) 取一小份等分试样作蛋白量测定。粗制的膜可于干冰/乙醇浴中速冻后，保存-85℃。