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        透析法除N- 十二烷基肌氨酸钠实验

        相关实验:透析法除 N- 十二烷基肌氨酸钠实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        材料与设备

        反相高效液相色谱(HPLC) 仪

        C18 反相 HPLC 柱(VYDAC?,4.6x250 mm)

        冰醋酸

        三氟乙酸(TFA)(2% 水溶液储液

        乙腈

        溶剂 A(0.1%TFA)(用 0.2-um 的尼龙膜过滤)

        溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)(用 0.2-um 的尼龙膜过滤)

        操作程序

        1)用反相 HPLC 分析透析时和透析后所取的样品(见 P.149)。

        2) 各样品取 100ul,加 5ul 冰醋酸,混匀。
        注:若样品极浑浊或有沉淀,可在进样前用微型离心机离心。

        3)C18 柱经 0.1%TFA/水/乙腈系统平衡后,进 50ul 经乙酸调节过的样品,215nm 检测。进样后,用溶剂 A 洗柱 5 min, 流速 1 ml/min。线性梯度洗脱:10 min 内从 100% 溶剂 A 至 100% 溶剂 B。再用溶剂 B 洗 3 min, 溶剂 A 洗 7 min。

        4) 再进一系列稀释的(0.005~0.075%)N-十二烷基肌氧酸钠(SKL) 标准品,以 SKL 峰高为浓度的函数作图。根据样品的峰髙计算样品中 SKL 的浓度,并以样品中的 SKL 浓度为时间的函数作图。

        5) 色谱柱使用后,先用 20 mlMilli-Q 纯水器制备的水冲洗,接着用 20 ml20% 甲醇冲洗,室温保存。
        注:用 100 ml 缓冲液 A 和 5 冰醋酸配制一空白样品,按上述方法分析。这可用来校正从柱上洗脱下来的任何溶剂峰。

        结果

        典型的反相 HPLC 色谱图,见图 3-6。

        透析法除N- 十二烷基肌氨酸钠实验

        来源:丁香实验

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