包涵体沉淀溶解实验

材料与设备

SDS-PAGE 电泳装置

聚丙烯酰胺小胶（10%)

分子量标准参照物

试剂

缓冲液 A

N-十二烷基肌氨酸钠（SKL)(20% 水溶原液）

考马斯亮蓝（CBB) 染色液

脱色液

快速蛋白质斑点印迹试验用试剂 (见 P.172)

(配方，见「试剂的配制」，PP.184~189)

操作程序

1) 第 2 次 2%D0C 悬液（见 p.149), 于离心前取 6x50-ul 等分试样。然后将这些样品用微型离心机全速离心 1 min, 弃上清。

2) 各沉淀物中分别加入 100ul 含 0%、0.1%、0.2%、0.3% 和 0.6%SKL 的缓冲液 A。沉淀物剧烈重悬后静置 10 min, 再用微型离心机离心 lmin，取上清样品，供快速蛋白质斑点印迹试验用（见 PP.172-173)，观察沉淀物的多少。

3) 每份上清作 SDS 凝胶电泳，并与样品 A、B—起做快速蛋白质斑点印迹试验。

4) 作凝胶电泳分析时，于 10% 的 SDS 凝胶上，样品 A、B、C、D 及 0.1%SKL 上清、0.2%SKL 上清、0.3%SKL 上清、0.4%SKL 上清、0.6%SKL 上清各加样 20ul, 分子量标准参照物加样 3ul,120V(20mA) 电泳约 60 min。

5) 凝胶用 CBB 染色液染色 30 min 后，置脱色液中漂洗、脱色，直至显现条带。