材料与仪器
| 试剂、试剂盒 | |
|---|---|
| 仪器、耗材 |
步骤
材料与设备
牛血清白蛋白（BSA) 或σ32 溶液，浓度约为 1mg/ml
干净的石英比色皿
分光光度计，可在 205nm 和 280nm 读数的
试剂
透析缓冲液
(配方，见"试剂的配制"，PP.184~189)
操作程序
1)BSA 溶液（~1mg/ml) 或未知浓度的待测纯蛋白溶液对 2X400 ml 的透析缓冲液透析 3~5 h, 充分搅拌。
2) 测定 A280nm(应在 0.25~1.0 范围内)。
3) 小心地用透析缓冲液将蛋白溶液稀释 30 倍（例如，200ul 样品加 5.8 ml 透析缓冲液)，测定 A205nm。
4) 用公式 E(1 mg/ml)205nm=27.0+120(A280/A205)，计算 E(1 mg/ml)205nm。
5) 计算：蛋白浓度=A205/E(1 mg/ml)205nm=
6) 计算：E(1 mg/1 ml)280nm=A280/蛋白浓度=
牛血清白蛋白（BSA) 或σ32 溶液，浓度约为 1mg/ml
干净的石英比色皿
分光光度计，可在 205nm 和 280nm 读数的
试剂
透析缓冲液
(配方，见"试剂的配制"，PP.184~189)
操作程序
1)BSA 溶液（~1mg/ml) 或未知浓度的待测纯蛋白溶液对 2X400 ml 的透析缓冲液透析 3~5 h, 充分搅拌。
2) 测定 A280nm(应在 0.25~1.0 范围内)。
3) 小心地用透析缓冲液将蛋白溶液稀释 30 倍（例如，200ul 样品加 5.8 ml 透析缓冲液)，测定 A205nm。
4) 用公式 E(1 mg/ml)205nm=27.0+120(A280/A205)，计算 E(1 mg/ml)205nm。
5) 计算：蛋白浓度=A205/E(1 mg/ml)205nm=
6) 计算：E(1 mg/1 ml)280nm=A280/蛋白浓度=
来源：丁香实验
