• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        从有限的细胞中提取 RNA 实验

        相关实验:从有限的细胞中提取 RNA 实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        一、材料

        1. 缓冲液、试剂和溶液

        75% 乙醇 (超纯水配制)

        糖原,5 mg/ml(Ambion,Austin,TX)

        StratageneRNA 提取试剂盒(200345,StratageneCloningSystems,LaJolla,CA),

        包括变性溶液、饱和酚 (存于 4°C)、β-巯基乙醇 (存于 4°C)、氯仿:异戊醇、

        2mol/L 乙酸钠、异丙醇。或者使用 PicoPureRNA 分离试剂盒(KIT0202,Arcturus,

        MountainView,CA)

        DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories,Houston,TX)(4°C 储存)

        2. 特殊设备

        移液器

        无 RNA 酶的 1.5 ml 管子

        3. 细胞和组织

        来自方案 3 的 LCM 帽子

        二、方法

        1. 加入 200ul 变性溶液和 1.6ulβ-巯基乙醇到 0.5 ml 管子中。

        2. 将 LCM 帽子插入管子,涡旋 5s。

        3. 倒置管子孵育 5 min。

        4. 移去 LCM 帽子。这一步获得的样品可以在-80°C 保存 6 个月。

        5. 将溶液转移到 1.5 ml 管子中。

        6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸钠,温和混匀。

        7. 加入 220ul 水饱和的酚(底层),温和混匀。

        8. 加入 60ul 氯仿:异戊醇,剧烈晃动。

        9. 放于冰上 15 min。

        10.14000r/min4°C 离心 30 min。

        11. 吸上层溶液到新管子中。

        12. 加入 2ul 糖原(最终浓度 10~150ug/ml)。

        13. 加入 200ul 冷异丙醇。

        14.-80°C 过夜。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序