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        利用 Trizol 从植物组织中制备 RNA 实验

        相关实验:利用 Trizol 从植物组织中制备 RNA 实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 缓冲液、溶液和试剂

        Trizol(Invitrogen)

        氯仿

        异丙醇

        乙醇,70%,用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水配制

        DEPC 处理过的水、

        液态 N2

        NaCl,1.2mol/L

        柠檬酸钠,0.8mol/L

        2. 特殊设备

        转子-定子均化器(或相当的)

        研钵和杵,在 DEPC 处理过的水中洗涤,液氮中预冻

        50 ml 圆锥形管,例如 Falcon

        3. 细胞和组织

        合适的植物组织

        二、方法

        1. 液氮预冻过的研钵中研磨约 1g 植物组织,操作时使用足够的液氮淹没植物组织。

        将组织研磨成很细的粉末,这点很重要。

        2. 将粉末转移到 50 ml 圆锥形管中,管中已按每克组织 10 ml 的量加入 Trizol。

        3. 使用转子-定子均化器均质化组织 30s。

        4.4°C 下 1500 g 离心裂解产物 15 min 以移去残渣。

        5. 将上清液转移到一新管中。每毫升 Trizol 加 200ul 氯仿。

        6. 将管颠倒数次以混合。室温下温育 5 min。

        7.4°C 下 1500 g 离心 20 min。将上清液转移到一新的 50 ml 管中。

        8. 加 0.5 倍体积异丙酵和 0.5 倍体积的 0.8mol/L 柠檬酸钠、1.2mol/L 氯化钠溶

        例如,对 500ul 体积的液相而言,应加 250ul 异丙醇和 250ul 柠檬酸钠溶液。

        9 混合,室温下温育 1min。于-20°C 保存过夜可提高 RNA 产量。

        10.4°C 下 1500 g 离心 20 min。

        11. 移弃上清液,每毫升 Trizol加 lml70% 乙醇,以进行初步抽提。

        12.1500 g 离心 15 min。小心移弃上清液,避免扰动沉降物。将沉降物风干。

        13. 将 RNA 溶解于 DEPC 处理过的水中。

        lg 成熟叶组织的 RNA 产量可达 500ug。

        这个方案对含多酚化合物或树脂的植物组织可能不适用。对富含多酚、树脂或淀粉的提取困难的植物组织,推荐使用 ConcertPlantReagent(Invitrogen)。

        来源:丁香实验

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