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        使用 Trizol 纯化 RNA 实验

        相关实验:使用 Trizol 纯化 RNA 实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一、材料
        1. 缓冲液、溶液和试剂
        Trizol(Invitrogen)
        氯仿
        异丙醇
        乙醇,75%,用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水配制
        DEPC 处理过的水
        2. 细胞和组织
        50~100 mg 已磨细的组织
        二、方法
        1. 将 lmlTrizol 加到含 50〜100 mg 磨细组织的微董离心管中。室温下温育 5 min。
        组织被磨细有助于 Trizol 将其裂解,这一点很重要。
        2. 加 200ul 氯仿,将管颠倒数次以混合。
        不推荐进行振荡,因之可导致基因组 DNA 的剪切和 RNA 制备物中 DNA 污染过多。
        3. 室温温育 3 min,1500 g 离心 15 min。
        4. 将液相转移到一新管。加 500ul 异丙酵。室温温育 l0 min。
        5.1500 g 离心 l0miri。RNA 将可见于管底。
        6. 移弃上清,小心避免扰动沉降物。
        7. 加 1 ml75% 的乙醇。重悬 RNA。4°C 下 1500 g 离心 5 min。
        8. 移弃乙醇并风干 RNA。
        9.RNA 溶解于 DEPC 处理过的水中。
        当使用以酚为基础的试剂时,为得到足够高的纯度,对得到的 RNA 进行笫二轮酚-氯仿抽提可能是必
        要的。

        来源:丁香实验

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