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        RNA 在甲酰胺中的溶解保存

        相关实验:RNA 在甲酰胺中的溶解保存

        最新修订时间:

        原理

        甲酰胺具有活泼的反应性和特殊的溶解能力,可用作有机合成原料,纸张处理剂,纤维工业的柔软剂,动物胶的软化剂,还用作测定大米中氨基酸含量的分析试剂。在有机合成中,医药方面的用途居多,在农药、染料、颜料、香料、助剂方面也有很多用途。

        也是优良的有机溶剂,主要用于丙烯腈共聚物的纺丝和离子交换树脂中,以及塑料制品的防静电涂饰或导电涂饰等。此外,还用于分离氯硅烷、提纯油脂等。甲酰胺可发生多种反应,除了由三个氢参与反应外,还可以进行脱水,脱CO,引入氨基,引入酰基和环合等反应。

        材料与仪器

        步骤

        一材料与设备

        所有的试剂配制均需采用经过蒸馏并消毒的去离子水。

        1) 无水乙醇

        2) 异丙醇

        3)75% 的乙醇

        4)100% 甲酰胺

        5)3mol/L 的乙酸钠

        6) 高速离心机

        7) 紫外分光光度计


        二操作方法

        1) 使用 CsCl 法,酸-苯酚法,TRIol 法或 RNaolB 法进行 RNA 的一步提取。

        2) 用无水乙醇 (CsCl 法)或异丙醇 (其他方法)沉淀 RNA, 离心获得 RNA 沉淀。

        3) 用 75% 的乙醇清洗 RNA 沉淀以除去多余的盐分。

        4) 晾干,尽量吸去乙醇,并确保 RNA 中没有多余的乙醇存在。

        5) 用保存的 100% 甲酰胺重悬 RNA。甲酰胺的用量应视 RNA 沉淀的多少而定,通常用量在 10ul 到 1000ul 之间。

        6) 大部分的 RNA 可立即溶解,可以在室温放置 15 min,并用吸头不时的上下吹打液体,以促进 RNA 的溶解。如果 RNA 的浓度很高,可以在 4℃ 放置过夜,以促进其完全溶解。

        7) 定量时,将 1ul RNA 溶液稀释到 500ul 水中,测量其 OD260

        8) 如果样品被过分稀释了,可以像水溶的 RNA 样品一样进行乙醇沉淀浓缩,加水溶解后使用。

        注意事项

        1. 当使用 CsCl 法进行 RNA 的提取时,更应注意 RNA 多余盐分的去除。

        2. 操作方法第4)步中,RNA 不要过分干燥。

        3. 测量 RNA 的 OD 值时,应在空内对照中加入 1ul 甲酰胺,以消除 RNA 产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景,

        常见问题

        测量 RNA 的 OD 值时,应在空内对照中加入 1ul 甲酰胺,以消除 RNA 产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景,

        来源:丁香实验

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