方案11.13 用小型串联式过滤器灭菌过滤

1. 将管（硅树脂管，与蠕动泵相配，接至滤器接口）与蠕动泵（最好有底部开关）相连。

2. 将上游端插入待过滤的培养基中。

3. 打开过滤器包装，与蠕动泵出口相连。

4. 将过滤器（带罩的串联式过滤器）夹在架子（固定滤器）的合适高度，使收集培养基的瓶子（有刻度的培养基瓶，铝箔包裹，干热法灭菌）正好位于过滤器的下方，瓶颈可被盖住，并且当装满的时候可以很容易地将瓶子取出。如果需要，可先用一个无菌培养瓶进行调试，但最后不要用这个瓶子收集无菌的液体。

5. 打开泵，收集约 20 ml 于瓶中用于调试。

6. 取出调试的瓶子（高温高压灭菌），盖上盖，标记上“1”。

7. 将第一个培养基瓶的铝箔拿掉，放在过滤钟罩下。

8. 打开泵。

9. 灌入瓶中至 100 ml。

10. 关闭泵。

11. 将瓶子取出、盖好、编号，换一个新的无菌培养基瓶。

12. 重复步骤 7~11，在 5 个瓶子中各装 100 ml，剩余的收集在最后一个瓶子中。

13. 在每个瓶子的上部空间充 5% CO₂ 气体。

14. 将铝箔重新包在盖子上，包到瓶颈处以保证保存时无尘。

15. 在瓶子上贴标签，标注日期，签名。

16. 将装有 100 ml 培养基的瓶子保存于 4°C 。

17. 将第一个和最后一个瓶子盖好置于 37°C , 孵育一周。

18. 将培养基存放于 4°C ，无菌检测完成之前不要使用。如果在检测样品中发现污染，则整批培养基要重新过滤或弃去。