方案 11.2 玻璃移液管的准备和灭菌实验

一、材料

1. 移液管圆筒（用于收集用过的移液管）

2. 消毒剂：次氯酸盐，用清洁剂稀释，最少应含有 300 μg/g 的氯（如常规用的次氯酸钠）

3. 清洁剂（如 7 X 或 Decon）

4. 不锈钢篮子（收集清洗过的移液管然后晾干）

5. 无菌指示器

6. 移液管罐（在两端分别有硅树脂垫的正方形的铝或不锈钢的容器；正方形的罐子不会滚动）（Thermo Electron）

7. 无菌指示胶带或塞（Bennett）

8. 灭菌烤箱：在有风扇的情况下温度可以达到 160°C，更适宜使用可记录温度计和易弯曲的探针。

二、操作步骤

收集和清洗 

1. 将含有消毒剂的清洁剂倒入装移液管的圆筒中。

2. 用后取掉吸头，立即将移液管弃于圆筒中（图 11.5）。
(a) 不要将移液管放在层流罩内，也不能让它变干。
(b) 不要将用于吸琼脂或硅树脂（防水剂或防沫剂等）的移液管与普通移液管放在同一个圆筒中。可用一次性的移液管吸硅树脂，吸完琼脂的移液管应用加热的自来水清洗，或者也可用一次性的移液管。

3. 移液管需浸泡过夜或至少 2 h。如果移液管的用量很多，应不时将装满的圆筒取回，加清洗液前先浸泡 2 h。

4. 浸泡后通过压缩空气取出棉花塞。

5. 将移液管放入移液管清洗器中，尖端朝上（图 11.4、图 11.5，亦见图 4.6）。

6. 用自来水通过清洗器的虹吸作用清洗移液管，至少 4 h，也可用带有移液接头的自动清洗机来清洗，但不要加清洁剂。

7. 将阀门转到去离子水（DW）或反向渗透水（ROW）处（图 4.6），或者等自来水冲洗完毕后，再用 DW 或 ROW 灌满、倒空，重复冲洗 3 次（在玻璃器皿清洗机中用自动去离子水漂洗循环）。

8. 将移液管放入移液管干燥机或烤箱中，尖端朝上。

9. 用棉花塞住管口（图 11.6）。

10. 将移液管按大小分类并储存在无尘环境中。

灭菌

1. 将移液管放入装移液管的罐中（两端贴上标有移液管大小的标签是非常重要的）。

2. 每个罐子装同一大小的移液管。

3. 少数几个罐子装 1 ml、2 ml、10 ml、25 ml 的移液管（例如，每个型号装 4 个）。

4. 在盖子和罐子之间贴上无菌指示胶带，并在胶带上写上日期。

5. 干热灭菌，160°C 1 h。要尽可能少用胶带，或换用温度指示标签（Alpha Medical；Bennnet），此标签很小并不含爆炸性物质。要在烤箱的中心检测温度，以保证这个最难到达的部位也能满足最低的灭菌条件。要保证烤箱 中的罐子之间有一定的空隙，这样可以使热空气流通（图 11.7）。

6. 从烤箱中取出移液管，冷却后将罐子拿到组织培养实验室。移液管可放置 48 h 以上，但要沿着罐子盖周围贴上胶带。