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        方案21.9 悬浮培养细胞生长曲线的绘制

        相关实验:悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验

        最新修订时间:

        原理

        以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养,每天计数细胞直至平台期。

        材料与仪器

        步骤

        材料

        无菌

        悬浮细胞培养
        培养液,l00 ml
        D-PBSA(细胞计数用)
        24 孔板

        非无菌

        装培养板的塑料盒
        CO2 温箱或 5% C02 以充盈塑料盒

        操作步骤

        1. 如单层培养那样(见方案 21.8 ) 将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。

        2 . 以不同时间从三孔中取样 0.4 ml,注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。

        3. 用电子细胞计数器汁数(见 21.1.2 节)或用血球计数器计数(见 21.1.1 节)。

        4 . 计算每个样本的细胞浓度,像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图(见 21.9.3 节)。细胞密度不适用于悬浮培养,因为它们不会贴附。

        提示 接种 2 个 75 cm2 培养瓶,每瓶 20 ml 不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取 0.4 ml,但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短,在画生长曲线期间不要换培 养液。或者将培养瓶装在振荡器上(Techne,Integra,BeHco),每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜,则不用从温室中取出培养瓶, 也不用打开封口膜就可以取样,将膜面擦净,颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。                                                                  

        来源:丁香实验

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