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        方案 21.4 用 Bradford方法测定蛋白质含量实验

        相关实验:用 Bradford方法测定蛋白质含量实验

        最新修订时间:

        原理

        溶解蛋白质,与染料混匀,l0min 后阅读 O.D.。

        材料与仪器

        步骤

        材料

        十二烷基硫酸钠(SLS,SDS),水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考马斯亮蓝 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%),溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷酸:将 100 mg 考马斯蓝溶于 50 ml 95% 乙醇,加人 100 ml 85% 磷酸;然后以 1L 水稀释。

        蛋白质标准溶液(如 BSAlOpg/ml);设计实验,然后间隔 1~2 个月,以 BSA 或相似的标准蛋白质(1 50ug/ml) 制作标准曲线。

        操作步骤

        1. 将蛋內质(1~20ug)或细胞(约 1X106) 溶于 100ul3.5 mmol/L SLS 或 0.3mol/L NaOH 中。

        2. 分别加人 100ul 试剂空白对照(SLS),100ul 受测蛋白质溶液,lOOul BSA 标准品,每个 3 管。

        3. 加人 lml 考马斯蓝。混匀溶液,静置 10 min。

        4. 在分光光度计 595nm 处,以试剂空白作对照,阅读受测管如 BSA 标准数字。

        提示 Bradford 法的试剂可以从 Bio - Rad 购得试剂盒。试剂盒中的磺基罗丹明(Sulforhodamine B) [Skehanetal, 1990 ] 和试剂 N -二(羟乙基)甘氨酸 (BCA ) [Smith et al., 1 9 8 5 ] 都可用于测定蛋白质的含量并且对微量滴定实验敏感度很高。Micro -BCA 试剂盒可从 Piece (见附录 ID ) 得到。这些试剂很灵敏,适用于少量细胞(约 1X103) 的检测。                                                                  

        来源:丁香实验

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