标题：方案 21.2 借电阻进行电子细胞计数实验

将细胞样品稀释在电解质（生理盐水或D-PBSA ) 中，然后移入带孔管子的下部，让0.5ml的样品溶液流过计数器以计算其中的细胞数。

材料
无菌：细胞培养物、D-PBSA、0. 2 5 % 粗制胰蛋白酶、生长培养基
非无菌：计数杯

操作步骤

1. 用胰酶消化单层培养的细胞，或从悬浮培养中收集样品。充分地混匀细胞悬液使之尽量分散成单个细胞。

2. 在一个 25m l 的烧杯或任一样品杯中，用计数液体以 1 : 50 稀释细胞悬液至 20m l。使用自动分散器（图 5. 2 0 ) 会加速稀释，会使重复性更好。
注意事项 快速地分配计数溶液会产生气泡，当这些气泡通过小孔时会被当作细胞统计在内。因而计数溶液在开始计数前应静置一会儿。如果溶液被先分配，然后再加入细胞，则出现气泡的可能性就会很小。

3 . 充分地混匀细胞悬液，然后移入带孔管子的底部，确保能覆盖住小孔，样品杯中的外部电极应位于计数溶液的液面之下。

4 . 检査程序设置：

(a) 临界值设定（细胞大小的下限通常为 7. 0um );

(b ) 检测体积（通常 0.5 ml)；

(c) 背景去除（视需要而定）；

(d ) 溶解设定（例如，若 20 ml 的 D-PBSA 中有 0.4 ml 被计数，则设为 50)。

5. 检査可见的模拟显示

(a) 确保所有的细胞都在设定的临界范围之内；

(b ) 检査细胞活力或细胞碎片（通过曲线的肩部或正常临界值下限以下的直方图来指示）。

(c) 检査细胞是否聚集成团（即出现在正常大小范围之上的颗粒)。

6 . 启动计数程序。

7 . 当计数周期完成时，细胞大小的分布情况将出现在模拟显示屏上（图 21.4)。 转换到数字显示屏后就可以得到每毫升的细胞数。