超净台无菌操作方法

实验材料

无菌物品

1、Eagle's 1 X MEM:用含HCO3 的Hank's液配制 100ml各种规格的、加棉塞的、放入方形吸管筒中的玻璃吸管 1ml、5ml、10ml、25ml或单独包装的塑料吸管

2、培养瓶(若用于实验操作1,需预先称) 25cm²

非无菌的物品

移液器或吸耳球；70%乙醉喷雾瓶；不起毛的棉签;吸水性好的纸巾;装有水和消毒剂的吸管筒、剪刀、抗乙醇的记号笔、笔记本、钢笔、实验指导等.

操作步骤

1.用棉签或纸巾随蘸 70% 乙醉擦拭工作面和洁净台内面.包括前屏板的内面.

2.从冷藏室、水摘或冷冻箱内取出培养基等.解冻.用70%乙醉擦洗瓶子,并把马上要用到的物品放到洁净台内.

3.挑选吸管,放到工作面一侧易于幸到的位置(图6.2).
(a)如果是玻瑞吸竹,打开吸管盒,把盖子放在其上或一边,开n向下;
(b)如果是塑料吸管,除去外包装,按规格、型号分类,把包襄着的吸竹摆放在架子上或盒子中.

4.选出你需要的其他玻璃器皿、嫂料制品仪器设备等.把它们放在近旁的手推车或工作台上

5.松开(但不移走)所有待用的瓶子的盖子.

6.去掉待移液的试荆瓶或培养瓶的盖子,口朝上放到洁净台单边、试剂瓶后面的}

工作台上,以保证手不会从其上方通过.如果某一时问仅打开一个瓶盖,可以把盖子夹在小指和手掌构成的弯中(图6.6),待移液完成后,把它重新盖回到原瓶子上.

7.选择吸管.
（a）如果是玻璃吸管,从盒中取出吸管时.要保持待取吸管在盒中与其他吸管平行,并尽叮能少地接触他们,特别是吸管头部,如果拿着的吸管接触了其他仍在盒内的吸管尾端.则不能再使用它;把吸管插人移液器中,吸竹指向你的外侧,握在刻度上面部分,这样,吸管进人试剂瓶或培养瓶的部分将不会被污染(图6.9).

(b)如果是塑料吸管,打开包装的上部,向外折,然后往下剥.将近剥到下方时,将吸竹端部插人吸耳球或移液器中,从包装纸中取出吸管,不要使吸管接触包装的外面部分或非无菌工作面,最后,将包装纸丢进废物筐中.

安全提示：将吸管擂入吸耳球或移液器时,不要太用劲,知果用力太大.吸告会破裂(图7.1.7.5.3节).

8.把吸管插在吸耳球或移液器上时,要使吸管保持合适的角度.并一直要注愈吸管的位置,不让吸管尖端接触试剂瓶外面或沾净台的内表面(图6.9中划圈区域).如果是初学尤菌技术者.做到这一点并不容易,但它是成功的必要条件,并可在实践中取得经验9.使试剂瓶向吸管倾斜,以便操作者的手不会移到瓶子的敞口上方.如果用一容址为sm】的吸竹吸取sm!培养液并转移到25cm2的培养瓶中时,培养瓶也同样要倾斜.

10.重复上步操作,并向另外4个培养瓶移液.如果要把液体移到数个瓶子中,可把这些培养瓶立着放置.一定要把它们放在沽净台的较内侧区城,而且不能使手在瓶子开n的上方移动(若用于练习1,要记录下来向5个培养瓶移液持续的时间).

11.把用过的吸管弃人装有消毒剂的吸管筒中.如果是塑料吸管.则丢进双倍加厚的可高温灭菌的生物危害袋中.

12.重新把培养瓶的盖子盖好.

13. 重复以上操作,用25ml的吸管分别向 5 个培养瓶转移 5ml 溶液.

14.重新把试刑瓶或培养瓶的盖子盖好.

15.实验完毕后,拧紧所有瓶子的盖子,井从工作面上移走所有不需要的溶液和实验材料.

16.如果要进行细胞培养的操作,则需称最培养瓶,检查所分装培养基的精确性,并于37℃放置 1 周,以检查可能的污染.

对在垂直式洁净台中操作来说，不要立即在开口器皿的上方操作.

对在水平式沽净台中操作来说,，不要在开口器皿的后方操作.