材料与仪器
步骤
1、一般细菌涂片检查：挑选痰液中脓性或带血部分，涂成均匀薄片，行革兰氏染色，镜检。
根据其细菌形态，排列和染色性，大致可以初步推定菌属（或种）如镜见排列成葡萄状的革兰氏阳性球菌，可报告为：「找到革兰氏阳性球菌，形似葡萄球菌」；如见到爪子仁形或矛头状的尖端相背，成双排列，具有明显荚膜的革兰氏阳性球菌时，可报告为：「找到革兰氏阳性双球菌，形似肺炎链球菌」；如查见短而粗的革兰氏阴性杆菌，排列多成双且有明显荚膜时，可报告为：「找到革兰氏阴性杆菌形似肺炎克雷佰菌」；如查见不易识别的细菌，则报告为：「找到革兰氏×性×形细菌。
2、培养
（1）痰培养前的处理：由于痰含有正常菌群，影响病原菌的检出，采用以下方法以减少正常菌群。将痰加入含有 15-20 ml 灭菌生理盐水的试管中，剧烈振荡 5-10s，然后用接种环将沉淀于管底的脓痰小片沾出，再放入另一试管内，以同样的方法反复二次，最后将剩余的脓痰接种在培养基上。
（2）选择培养基：下呼吸道的病原菌种类繁多，除一般细菌外，还有结核菌、真菌、厌氧菌等。所以，除基本分离培养外，还须用特殊培养基和适当的培养环境。一般须用以下几种分离方法。
a）血平板：适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌、葡萄球菌。血平板放 CO2 或厌氧环境易于分离肺炎链球菌和β溶血性链球菌。
b）巧克力平板于 CO2 环境下分离嗜血杆菌，脑膜炎奈瑟氏菌。
其它：TTC-沙保弱氏培养基，改良罗氏培养基，厌氧环境等。
3、报告方式：
检出致病菌时，除报告该菌的鉴定名称外，还需同时报告正常菌群的情况。通常以报告草绿色链球菌和奈瑟氏菌作为正常菌群存在的指标。报告的各种细菌应该注明各自所占比例情况，以「＋」号表示。如草绿色链球菌（＋），奈瑟氏菌（＋），肺炎克雷伯氏菌（＋＋）。此报告表明肺炎克雷伯氏菌在数量上多于正常菌群，诊断为病原菌。未检出致病菌时，应报告「正常菌群」。
根据其细菌形态，排列和染色性，大致可以初步推定菌属（或种）如镜见排列成葡萄状的革兰氏阳性球菌，可报告为：「找到革兰氏阳性球菌，形似葡萄球菌」；如见到爪子仁形或矛头状的尖端相背，成双排列，具有明显荚膜的革兰氏阳性球菌时，可报告为：「找到革兰氏阳性双球菌，形似肺炎链球菌」；如查见短而粗的革兰氏阴性杆菌，排列多成双且有明显荚膜时，可报告为：「找到革兰氏阴性杆菌形似肺炎克雷佰菌」；如查见不易识别的细菌，则报告为：「找到革兰氏×性×形细菌。
2、培养
（1）痰培养前的处理：由于痰含有正常菌群，影响病原菌的检出，采用以下方法以减少正常菌群。将痰加入含有 15-20 ml 灭菌生理盐水的试管中，剧烈振荡 5-10s，然后用接种环将沉淀于管底的脓痰小片沾出，再放入另一试管内，以同样的方法反复二次，最后将剩余的脓痰接种在培养基上。
（2）选择培养基：下呼吸道的病原菌种类繁多，除一般细菌外，还有结核菌、真菌、厌氧菌等。所以，除基本分离培养外，还须用特殊培养基和适当的培养环境。一般须用以下几种分离方法。
a）血平板：适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌、葡萄球菌。血平板放 CO2 或厌氧环境易于分离肺炎链球菌和β溶血性链球菌。
b）巧克力平板于 CO2 环境下分离嗜血杆菌，脑膜炎奈瑟氏菌。
其它：TTC-沙保弱氏培养基，改良罗氏培养基，厌氧环境等。
3、报告方式：
检出致病菌时，除报告该菌的鉴定名称外，还需同时报告正常菌群的情况。通常以报告草绿色链球菌和奈瑟氏菌作为正常菌群存在的指标。报告的各种细菌应该注明各自所占比例情况，以「＋」号表示。如草绿色链球菌（＋），奈瑟氏菌（＋），肺炎克雷伯氏菌（＋＋）。此报告表明肺炎克雷伯氏菌在数量上多于正常菌群，诊断为病原菌。未检出致病菌时，应报告「正常菌群」。
来源：丁香实验
