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        米吐尔直接显色法检测血清无机磷实验

        相关实验:米吐尔直接显色法检测血清无机磷实验

        最新修订时间:

        原理

        利用磷在酸性溶液中与钼酸铵起反应生成磷酸钼酸络合物,能被N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐(米吐尔)还原生成用蓝,在试剂中加入吐温-80以抑制蛋白质的干扰。

        材料与仪器

        步骤

        一、实验试剂:

        l.钼酸铵溶液:在50ml去离子水中加浓H2SO43.3ml,再加钼酸铵0.2克溶解后加吐温-80 5ml,最后加去离子水至100ml。

        2. N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐(米吐尔)溶液:称取对甲氨基酚硫酸盐2克溶于80ml去离于水中,加无水硫酸钠5克;最后加去离子水至100m1。

        3. 显色应用液:取1液10ml,2液l.lml混合即可应用。

        4. 磷标准液:

        (l)无机磷标准贮存液(lml=lmgP)称取无水磷酸二氢钾(KH2PO4)4.39克用去离于溶解后移入1L容量瓶中,并稀释至刻度,再加氯仿2ml防腐,置冰箱中保存。

        (2)无机磷标准应用液(lml=0.04mgP或1.29mmol/L):取无机磷标准贮存液4ml,加入100ml容量瓶中,加去离于水稀释至刻度,再加人氯仿防腐,置冰箱中保存.

        二、实验操作:取试管3支,标明测定,标准和空白管,然后按下表操作:

        米吐尔直接显色法检测血清无机磷实验

        混匀后置37℃水浴10min,取出用分光光度计在650nm波长,以空白管调零,10mm光径比色杯进行比色,读取各管的吸光度。

        三、计算:

        血清无机磷mmol/L=测定管吸光度/标准管吸光度×1.29

        参考值:成人:0.96-1.62 mmol/L(3.0-5.0 mg/dL)

        儿童:1.45-2.1 mmol/L(4.5-6.5 mg/dL)

        注意事项

        1. 血清标本不能溶血,采血后及时分离血清,黄疸和脂血标本应做标本主白。

        2. 本法对血清白. 球蛋白比例倒置的标本易产生混浊,解决的方法是用30g/L三氯醋酸1.8ml分别混匀后离心,取上清液1.0ml,磷标准液同样进行处置,然后和显色液4.0ml混合后进行比色。

        3. 米吐尔试剂应少量配制,放置时间不易太长,否则正常血清有时也会产生轻度混浊。

        来源:丁香实验

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