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        尿液中17-酮类固醇测定实验

        相关实验:尿液中 17-酮类固醇测定实验

        最新修订时间:

        原理

        尿液经酸水解,使结合型17-酮类固醇变游离型17-酮类固醇。后者在碱性溶液中能与间二硝基苯反应呈红色。

        材料与仪器

        步骤

        一、. 实验试剂:

        1. 无水乙醇

        2. 10/1000 间二硝基苯溶液

        3. 5mol/L的KOH

        4. 70%去醛乙醇

        5. 雄酮标准溶液(1ml=0.2mg)

        二、实验操作方法:

        l. 取洁净容器加人10ml浓HCL作为防腐剂。然后收集24h尿液准确记录总尿量。

        2. 将尿液混匀吸取5ml于三角烧杯中,加冰酯酸5ml加热沸腾,回流水解10min,流水冷却。

        3. 此经水解的尿液放入分液漏斗中,加入乙醚(AR)约20ml振摇2-3min,静置分层以后,弃去下层尿液.

        4. 加lmol/L的NaOH 10ml轻轻颠倒20次,弃去NaOH层,再加蒸馏水15ml轻轻颠倒20次,弃去NaOH层,再加蒸馏水15mL轻轻颠倒20次,弃去水层。

        5. 将洗过的乙醚提出液放入一只有20ml刻度的大试管中,用少量乙醚洗漏斗壁,此洗涤乙醚放入大试管中,然后加乙醚补充至20ml刻度混匀。

        6. 取2支大试管每管各取上乙醚提出液5ml一管作测定,另一管作测定空白,置37℃干燥箱中使乙醚挥发干。

        7. 取上述制备的标准管一支,内含雄酮0.02mg。

        以上各管按表进行操作:
        尿液中17-酮类固醇测定实验
        混匀在530nm波长处以70%去醛乙醇溶液调零分别读取各管吸光度。

        三、 计算:

        (测定管吸光度-测定空白管吸光度-试管空白吸光度)/(标准管吸光度-试管空白吸光度)×0.02×24h尿总量(ml)/[(5/20)×5]= 17-酮类固醇mg/24h尿

        注意事项

        1. 所用的乙醇需要精制。

        2. 市售间二硝基苯需要纯化。

        3. 所用乙醇必须分析纯。

        4. 当尿液用乙醚振摇混提出后如发现乙醚与尿液分层不明显,可加入饱和NaCL溶液数ml继续振摇之。

        5. 水解时,采用硝酸较为温和且水解较安全。

        6. 所需试管吸管需干燥无水,否则影响结果。

        7. 本法所显色不够稳定,颜色化合物对光敏感故显色及比色时均应暗处进行,比色步骤须于加完试剂后6-12min完成,大批标本宜分批显色。

        来源:丁香实验

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