血清白蛋白溴甲酚绿法测定实验

在pH4．2的缓冲液中，白蛋白作为一种阳离子，结合阴离子染料溴甲酚绿（BCG）形成蓝绿色化合物，在波长630nm处有吸收峰，其吸光度与白蛋白浓度成正比例，与同样处理的白蛋白标准液比较可求得血清中白蛋白含量。

一、实验试剂。

1、0．5mol／L琥珀酸缓冲贮存液（PH4．0）溶解Na0H  10g琥珀酸 56g于 800m1蒸馏水中，用1mol／L氢氧化钠调至pH4.1＋0.05加水稀释至1000ml此液置4℃冰箱保存．

2、BCG已存液（10mol／L）：溶解BCG（MW＝720.22）1.80g于5m1  Na0H中用蒸馏水稀释至250ml．

3、叠氮钠贮存液：溶解叠氮钠40g于1000ml蒸馏水中。

4、聚氧化乙烯月桂醚（BYij－35）贮存液溶解2.5g聚氧化乙烯月桂醚于80ml蒸馏水中，加热助溶然后加蒸馏水至10ml．

5、BCG试剂：与1L容量瓶中盛蒸馏水约400m1，加琥珀酸缓冲贮存100ml，用吸管准确加入BCG贮存液8．0m1，并用蒸馏水将吸管壁上残留的少量染料冲洗到液体中加叠氮钠25ml，聚氧化乙烯月桂醚25ml最后用蒸馏水稀释到刻度，配好BCG试剂应为4.15土0.05。

6、40g／L白蛋白标准应用液

二、实验操作：按下表进行

波长630nm。用空白管调零，用定量加液器加BCG应用液与血清标本混合后，立即在30土3S，读取吸光度，如果标本混浊可做标本空白管（血清0．02m1加琥珀酸缓冲液40ml）以琥珀酸缓冲液调零测定标本空白管吸光度，测定管吸光度减去标本空白管吸光度后计算结果．

三、实验操作：按下表进行


四、计算：

血清白蛋自（g／L）＝测定管吸光度／标准管吸光度×标准管白蛋白浓度（g/L）

同时测定血清标本的总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度，即得血清球蛋白浓度，并可计算血清白、球蛋白比值．

参考值：35－55g/L

1、实验证明BCG不但与白蛋白显色，而且与各种蛋白成分显色其中以球蛋白、转铁蛋白、融珠蛋白更为显著，其反应度较该蛋白稍慢，故有人主张用定值参考血清作标准比较理想，BCG与血清特异结合后，在此30秒读取吸光度，可明显减少非特异性结合反应.

2、当60g/L白蛋白标准与BCG结合后，溶液光径1.0cm。，在630nm测定的吸光度0．811士0．035，。如达不到此值，表示灵敏度较差。

3、此法测定正常血清标本的批间异系数－6．3％左右．

4、试剂中的聚氯化乙烯月桂醚也可用其它表面活化剂代替，如吐温－20等，用量为2ml／L。