高碘酸－雪夫氏反应实验

PAS反应显示糖类的原理是由于含有乙二醇基的多糖类，在过碘酸的作用下，氧化产生醛基，此醛塞进而与Schiffs液作用便无色品红变成紫红色染料而附着于含有多糖类的组织上．

碱性品红＋2H2SO3→品红亚硫酸（无色）
   
品红亚硫酸＋带醛基物质→无色物

一、实验试剂：

1. 标本选择：一般可用于新鲜干燥的涂片，未染而长期储存的标本也可用。如用瑞氏法染过的标本，先用酸酒精脱色然后进行PAS染色亦可．

Schiff氏液．

2. 配制：碱性复红1克溶于200毫升沸水中，冷却至60℃时进行过滤，滤后、加20毫升1N HCI再加入NaHSO32克（多加亦可），以有强烈的SO2刺鼻味为佳，塞紧瓶口过滤，液体呈淡茶色可用．之后再加入300mg活性炭过滤，滤液应透明无色．保存于4℃冰箱．

二、实验步骤

1. 干燥血片或骨髓片固定于95％酒精10分钟

2. 蒸馏水冲洗几次

3. 1％过碘酸（水溶液）10分钟（可用1-2周）

4. 用蒸馏水冲洗几次

5. 放入Schiff’s液30分钟

6. 自来水冲洗（大约5分钟）最后用蒸馏水冲洗，然后用2％甲绿复染20分钟．

积分标推：（血片计数小淋巴细胞）

“0”　 　　胞浆内没有颗粒

＋  　　　  胞浆中有一圈PAS阳性颗粒

＋＋　   　 胞浆中有二圈PAS阳性颗粒

＋＋＋      胞浆内有三圈PAS阳性颗粒，或有大团块形成

计数100个细胞求其积分

正常值：（血片淋巴细胞）

阳性率10-30％，积分12-56，均数31

有核红细胞积分法：

“0”　　　 阳性

“＋”      胞浆中分散有少量阳性颗粒或呈浅红色，应比正常红细胞色深

“＋＋”    胞浆中有1或2个浓的颗粒环，或胞浆呈中等度弥散之红色

“＋＋＋”  胞浆中有大量浓颗粒，或呈甚深之红色

正常值：有核红积分0-7大多数阴性．

1. Schiff’s液变红即不能再用，

2. Schiff’s液中SO2饱和度与PAS反应的恒定性有关，NaHSO3如时间久了会失效，配出SO2达不到饱和，因此NaHSO3可多加。

3. 碱性品红出厂牌号与染色深浅有关，加NaHSO3过夜后仍为红色则说明染料不合用．

4. 活性炭可以多加，其目的在于吸附颜色，如系品红不合用多加活性炭颜色亦不能被吸附．

5. 配制Schiff’s液器械需十分清洁干燥。