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        叶绿素的理化性质测定实验

        相关实验:叶绿素的理化性质测定实验

        最新修订时间:

        原理

        叶绿素是一种二羧酸的酯,可与碱起皂化作用,产生的盐能溶于水,可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素与类胡萝卜素都具有共轭双键,在可见光区表现出一定的吸收光谱,可用分光镜检查或用分光光度计精确测定。叶绿素吸收光量子后转变成的激发态叶绿素分子很不稳定,当它回到基态时,可以发出红光量子,因而产生荧光。叶绿素的化学性质也很不稳定,容易受强光的破坏,特别是当叶绿素与蛋白质分离后,破坏更快。叶绿素分子中的镁可被H+所取代而成为褐色的去镁叶绿素,后者遇到Cu2+可形成绿色的铜代叶绿素,这种叶绿素在光下不易受到破坏,故常用此法制作绿色多汁植物的浸制标本。

        材料与仪器

        步骤

        1. 叶绿体色素提取

        称取新鲜叶片2g剪碎于研钵中,加少量95﹪酒精(或80﹪丙酮)和少量CaCO3粉及石英砂,研磨成匀浆,再加95﹪酒精(或80﹪丙酮)l0ml稀释研磨后,用滤纸过滤于小瓶中,滤液即为叶绿体色素提取液。

        2. 叶绿素的皂化作用(绿色素与黄色素的分离)

        (1) 用移液管吸取叶绿体色素提取液约5ml放入试管中,再加入1.5ml左右20﹪KOH甲醇溶液,充分摇匀。

        (2) 片刻后,加入5ml苯,摇匀,再沿试管壁慢慢加入1~1.5ml蒸馏水,轻轻混匀(勿激烈摇荡),静置试管架上,可看到溶液逐渐分为两层,下层是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化叶绿素a和b(以及少量叶黄素),上层是苯溶液,其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。

        3. H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用

        (1) 吸取叶绿体色素提取液约5ml放入试管中,加入30﹪醋酸数滴,摇匀,观察溶液颜色的变化。

        (2)当溶液变褐色后,倾出一半于另一试管中,投入几粒醋酸铜粉,微微加热,观察溶液颜色变化,与未加醋酸铜的一管相比较。

        (2)解释上述颜色变化过程,并列出其反应式。

        4. 叶绿素的荧光现象

        取比较浓的叶绿素提取液5ml放入试管中,在直射光下观察溶液的透射光及反射光

        的颜色有何不同?试述其原因。

        5. 光对叶绿素的破坏作用

        (1)取两支试管,各加入经稀释的叶绿体色素提取液5ml,一管放在直射光下,另一管放在黑暗处,1~2 h后观察二管溶液颜色有何变化。

        (2) 另取上述实验Ⅰ中用纸层析法分离成的色谱两张,一张放在直射光下,另一张放在黑暗中。约1 h以后比较两张色谱上四种色素的颜色各有何变化。

        (3) 解释以上结果。

        来源:丁香实验

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