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        氨茶碱注射液血药浓度测定实验

        相关实验:氨茶碱注射液血药浓度测定实验

        最新修订时间:

        原理

        吸收光谱重叠的a,b组分共存时,若要测定b组分,利用双波长分光光度法能消除a组分的干扰。其方法是选取二个波长λ1和λ2,使组分a在这两个波长处的吸收度相等;而对欲测b组分,在两波长处的吸收度有显著差别。用这样两个波长测得混合物的吸收度之差△A,只与b组分的浓度成正比,而与a组分浓度无关。因此,可以消去a的干扰。

        氨茶碱为临床常用平喘药,由茶碱和乙二胺结合而成。其在体液中很快分离出茶碱,在酸性条件下,可用有机溶剂从血清中提出茶碱。并同时沉淀血清蛋白;再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出。在λ274和λ298处测定碱性提取液的吸收度(A),A274为茶碱和本底(溶剂、血清)吸收度,A298为本底的吸收度,茶碱的吸收度为△A=A274-A298,即可测定氨茶碱血药浓度。

        材料与仪器

        步骤

        1. 动物准备及给药 

        取体重2.5~3 kg健康家兔1只,一耳缘静脉注射氨茶碱15mg/ kg(2 min注完),另一耳用锐利刀片切割取血。

        2. 取血 

        给药后0 min、10 min、20 min、30 min、60 min、120 min、180 min、300 min、420 min采用耳静脉切割法分别取静脉血2 ml。

        3.茶碱标准曲线制作 

        取5支刻度试管,依次加入茶碱标准液20μl、40μl、60μl、80μl、100μl,各加入0.1mol/LNaOH溶液4.0 ml,终浓度依次为0.5μg/ ml、1.0μg/ ml、1.5μg/ ml、2.0μg/ ml、2.5μg/ ml,以0.1mol/LNaOH溶液为空白,于274 nm、298 nm处测定吸收度,绘制ΔA~C曲线。

        4. 血药浓度的测定 

        吸取血清0.5 ml至刻度试管中,加0.1 mol/LHCl溶液0.2 ml,5%异丙醇氯仿溶液5 ml,振摇、混合,离心(2500r/ min)10 min,吸取氯仿液(下层)4.0 ml置另一试管中,加入0.1mol/LNaOH溶液4.0 ml,摇匀,离心(2500r/ min)10 min。吸取碱液(上层)3~3.5  ml,以0.1 mol/LNaOH为空白,于274 nm、298 nm处测定吸收度,计算ΔA。

        5. 将测得血清样品的△A代入标准曲线的方程,求得相应的C。

        注意事项

        1. 紫外分光光度计使用前需预热30min并激发氢灯。

        2. 振摇混匀药液时防止溅出并准确加样。

        3. 样品离心前需配平。

        4. 测量时若更换波长,必须重新调节0和100%。

        来源:丁香实验

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