碘液显色法

酶都是蛋白质，它的活性受环境pH的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其最高活性时pH的值，称为该酶的最适pH。

溶液配制：

0.5%淀粉溶液（含0.3%氯化钠）（新鲜配置），碘-碘化钾溶液（4 g碘及碘化钾6 g溶于100 ml蒸馏水中，于棕色瓶中保存），0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液，0.1 mol/L柠檬酸溶液。

1.  样品收集

漱口后收集唾液,用漏斗加少量脱脂棉过滤,滤液稀释100倍备用。
 
2.  pH对酶活性的影响
 
（1）缓冲液的配制



（2）底物的准备
 
6支干燥的试管编号，依次加入不同 pH 的缓冲液各3 ml，第6号试管与第3号相同。再向每个试管中添加0.5%淀粉溶液2 ml，摇匀。
 
（3）酶促反应时间测定
 
向第6号试管加入稀释100倍的唾液2 ml，摇匀后放入37 ℃恒温水浴中保温。每分钟取1滴混合液于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，呈橙黄色时取出试管，记录时间。
 
（4）最适 pH 测定

以1 min的间隔，依次向1～5号试管中加入稀释200倍的唾液2 ml，摇匀，同样以1 min间隔，将5只试管放入37 ℃恒温水浴中保温，反应至所需时间。依次取出，立即加入碘化钾-碘液2滴，充分摇匀。观察颜色，可看出不同pH值时淀粉被水解的程度，不同pH值对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其最适pH。
 
3. 温度对酶活性的影响
 
（1）取三支试管按下表操作：



加毕，分别按上述条件继续放置10 min。

(2)从三支试管中取出溶液1滴于反应板上，加上1滴碘液，观察呈色现象，记录结果并解释其原因。