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        薄层层析

        相关实验:糖的硅胶 G 薄层层析实验

        最新修订时间:

        原理

        硅胶 G 是一种添加了粘合剂的硅胶粉,约含12 %-13 %的石膏,它可以把一些物质从溶液中吸附于自身的表面上,利用它对各种物质的吸附能力不同,再用适当的溶剂系统展层,使不同的物质得以分开,使用显色剂显色,得到不同的 Rf 值。糖在硅胶 G 薄层上的移动速度与糖的分子量和羟基数有关,经过适当的溶剂展开后,糖在薄层上的移动速度是戊糖>己糖>双糖>三糖。

        材料与仪器

        步骤

        溶液配制:

        1 . 糖标准溶液: 木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10 mg/ml 水溶。
         
        2 . 样品液:多糖的水解液。
         
        3 . 展开剂: ①乙酸乙酯∶乙酸∶水=2∶1∶1;②氯仿∶甲醇=60∶40(V/V)。
         
        4 . 显色剂: ①25%~50%硫酸;②二苯胺1 g,苯胺1 ml和 85%磷酸5 ml 溶于50 ml 丙酮中。

        操作步骤:
         
        1.将硅胶 G 板于100 ℃烘箱活化后冷却至室温,用毛细管点样,点样位置为从硅胶板下端1.5 cm,两侧2~3 cm,每个样品点相距1~1.5 cm,斑点直径2 mm。点一次吹干一次。
         
        2.将展层剂于层析缸中平衡。数分钟后,将硅胶板放入。
         
        3.当展层剂移至距上端2~3 cm时,取出硅胶板吹干,均匀喷上显色剂,于100 ℃显色。
         
        4.15~30 min后从烘箱取出,测量 Rf 值。

        常见问题

        1.薄层层析与其他层析法比较有哪些优点?
        2.选用展层剂的依据是什么?
        3.糖的显色剂还有哪些?

        来源:丁香实验

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