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        酶法

        相关实验:血糖测定实验

        最新修订时间:

        原理

        血糖中β-D葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下,氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶催化下,氧化氧的受体——邻联甲苯胺产生有色化合物。在有足够的葡萄糖氧化酶和过氧化物酶存在下,形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比,并在625 nm处有最大吸收。

        材料与仪器

        步骤

        溶液配制:

        1. 1%邻联甲苯胺溶液:1 g邻联甲苯胺溶于100 ml无水乙醇,于棕色瓶保存。
         
        2.醋酸缓冲液(pH 5):300 ml 0.15 mol/L醋酸(8.7 ml冰乙酸定容至1 L),700 ml 0.15 mol/L醋酸钠混合后调pH 至5(用氢氧化钠或盐酸)。
         
        3.葡萄糖氧化酶,辣根过氧化酶:10 mg溶于10 ml水中,放于4 ℃保存。
         
        4.含邻联甲苯胺试剂:150 mlpH5醋酸盐缓冲液,1 ml葡萄糖氧化酶溶液,1 ml过氧化物酶,1 ml 1%邻联甲苯胺溶液,混合后保存在4 ℃下,可存放7周。
         
        5.标准葡萄糖溶液:100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液(安息香酸0.3 g溶于100 ml水),成1 mg/ml。

        实验操作:


        取三支试管,按如下顺序操作:

        空白管蒸馏水                                      1 ml
        标准管标准葡萄糖溶液                      1 ml
        测定管待测样品(无蛋白血滤液)       1 ml

        待测样品含糖控制在400~600 μg/ml。每隔半分钟依次向各管加入含邻联甲苯胺试剂5 ml,立即混合并准确反应10 min(夏季反应时间可缩短),在波长625 nm处,每隔半分钟分别读取光密度值,以空白作为比色时的对照。

        按下列公式计算:
        酶法

        来源:丁香实验

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