煮沸小量制备法
最新修订时间：
原理
推荐采用本方案从1~24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA，尽管该方案十分快捷，但制备的DNA的质量要比碱裂解法差。
材料与仪器
步骤
1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养基中，于37 °C培养至饱和状态或至少到对数生长中期（约6 h)。
2. 取1.5 ml菌液以最大转速离心20 s，弃上清。
3. 加入300 μl含200 μg溶菌酶的STET溶液重悬沉淀。在涡旋混合器上振荡混匀，冰上放置 30 s~10 min。
4. 将管放人沸水中（100°C） 1~2 min。
5. 离心15~30 min，吸上清移人一个新的微量离心管中。
6. 加人200 μl预冷的异丙醇，于-20°C放置15~30 min。
7. 以最大转速离心5 min，倒转离心管，弹数次，去除上清，真空干燥直至沉淀呈透明。
8. 沉淀溶于50 μl TE缓冲液中，于4°C短期保存，于-20°C或-70°C长期保存。取5 μl进行限制酶酶切分析。
2. 取1.5 ml菌液以最大转速离心20 s，弃上清。
3. 加入300 μl含200 μg溶菌酶的STET溶液重悬沉淀。在涡旋混合器上振荡混匀，冰上放置 30 s~10 min。
4. 将管放人沸水中（100°C） 1~2 min。
5. 离心15~30 min，吸上清移人一个新的微量离心管中。
6. 加人200 μl预冷的异丙醇，于-20°C放置15~30 min。
7. 以最大转速离心5 min，倒转离心管，弹数次，去除上清，真空干燥直至沉淀呈透明。
8. 沉淀溶于50 μl TE缓冲液中，于4°C短期保存，于-20°C或-70°C长期保存。取5 μl进行限制酶酶切分析。
注意事项
1. 为了获得高产量的DNA，一定要使菌体完全重悬。
2. 如有必要，往待消化混合液中加人1μl 10 mg/ml RNA酶溶液（不含DNA酶）以去除污染的RNA。
2. 如有必要，往待消化混合液中加人1μl 10 mg/ml RNA酶溶液（不含DNA酶）以去除污染的RNA。
常见问题
1. 参考文献：Birnboim，1983； Heetal，1991；Holmes and Quigley，1981。
2. 撰稿人：JoAnneEngebrecht，Roger Brent，and Mustak A，Kaderbhai。
来源：丁香实验
