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        夹心法ELISA

        相关实验:人 α2a,α2b 干扰素检测实验

        最新修订时间:

        原理

        选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb,1种McAb作为包被抗体,另1种McAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为结合物,催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线,在标准曲线上查出待检标本的含量。

        材料与仪器

        步骤

        1.  向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100 μl/孔,4 ℃  24~48 h

        2.  洗3次,加入10倍连续稀释的待测标本(做4个稀释度即可)或倍比稀释的标准品(6个稀释度)100 μl/孔,37 ℃,1 h
            
        3.  洗3次,加入稀释好的酶标抗体100 μl/孔,
        37 ℃,45 min
            
        4.  洗4次,加入配好的ABTS底物液100 μl/孔,
        RT,30 min
                     
        5.  测410 nm OD
                 
        6.  绘标准曲线

        注意事项

        1.  待检标本必须无污染,无溶血。
          
        2.  标本稀释后加入ELISA板时,注意从低浓度向高浓度依次加入。
          
        3.  结合物稀释液和底物缓冲液中禁止加入叠氮钠。

        来源:丁香实验

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